卷枝毛霉Δ-%276--脂肪酸脱氢酶基因在大肠杆菌和烟草中的表达.pdfVIP

摘 要 Y．弧麻酸(GLA；Ct8：3．A6,9，12)是一种人体必需脂肪酸，是具有重要生理活性物质前列腺 素、花生四烯酸和白三烯的前体，在人体的激素调节以及脂肪酸代谢过程中有着重要的生理作用。 v一亚麻酸资源稀少而又具有独特的生理功能，因此其合成过程中的关键酶△6-脂肪酸脱氢酶成为 国内外学者研究的热点。 本课题在卷枝毛霉M：，的△6．脂肪酸脱氢酶基因于酵母中进行功能验证的基础上，探索建立该 基因在大肠杆菌及烟草等模式生物中的表达体系。旨在通过基因工程技术，构建原核表达载体进 而获得高产T．亚麻酸的大肠杆菌工程菌株；构建植物表达载体，探索利用植物基因工程改良油料 作物品质的可行性。 (1)A6-脂肪酸脱氢酶基因在大肠杆菌中表达： 用限制性内切酶Xho 别回收大载体片段和目的基因片段，将回收纯化的酶切产物在T。．DNA连接酶的作用下进行连接， 从转化的大肠杆菌DH5a中筛选含有目的基因并且正确插入的重组质粒pGEx4r．1-△6。将重组 质粒转化到原核表达宿主菌BL21中，在适宜的培养基及培养条件下进行蛋白诱导表达，△6．脂 lo。经Western 肪酸脱氢酶大小为52，4kD，加上GST标签之后目的蛋白的大小为78．4 blot分析 鉴定，卷枝毛霉△6一脂肪酸脱氢酶基因在大肠杆菌中有微量表达，说明在原核系统中表达该基因 是可行的。 (2)A6脂肪酸脱氢酶基因在烟草中表达： 过对抗性烟草进行PCR检测，获得21株携带△6．脂肪酸脱氢酶基因的阳性植株，其中17株含种 子特异性启动子，4株含组成型启动子。 后续试验主要对烟草种子的脂肪酸成分进行气相色谱分析，以期获得△6．脂肪酸脱氢酶基因 在植物中表达的更多信息，为今后油料作物的转基因改造提供理论依据。 关键词： 卷枝毛霉，△6．脂肪酸脱氢酶，表达，大肠杆菌，烟草 Abstract acidforhuman is anessential Gammadinolenic A*6,9，12)is fatty beings．It acid(GLA；C18：3 in leukotrieneswhichhave actions acidand manyphysiological ofprostaglandin，arachidonic precursor acid GLAhas hormonal and metabolize many functions，its fatty pathway．Though unique regulation are a of aciddesatLlrase resourcesnot result，theenzymesynthesizingGLA，A4一fatty enough．As key hot ofresearch。 becomestheworldwide spot and itsfunctionin We cloned acidde