黄孢原毛平革菌选择性合成木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶.pdfVIP

第2 卷 第2 期 过 程 工 程 学 报 Vol.2 No.2 2002 年 4 月 The Chinese Journal of Process Engineering Apr. 2002 黄孢原毛平革菌选择性合成木质素过氧化物酶 和锰过氧化物酶 李华钟， 章燕芳， 华兆哲， 陈 坚 (江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214036) 摘 要：在黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosp orium) 的限氮浸没式培养中，研究了不同条件 对选择性合成木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP) 的作用. LiP 只在很窄的氮源浓度范围 内(0.8∼1.8 mmol/L)才能测到，而MnP 在较宽浓度范围内(0.4∼1.8 mmol/L)表现出较高的酶活水平. 培养基中缺乏Mn2+不能合成MnP ，但可以得到活力较高的LiP. [Mn2+]在0.06∼0.84 mmol/L 时可获 得LiP. 添加微量Mn2+ 即可获得较高活力的MnP ，此后增加Mn2+对MnP 的活力影响不大，直至浓 度为3.36 mmol/L 才表现出明显的抑制作用. 通纯氧可使LiP 活力提高50%，但对MnP 影响不大. 关键词：黄孢原毛平革菌；木质素过氧化物酶；锰过氧化物酶；选择性合成 中图分类号：Q939.9 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2002)02−0137−05 1 前 言 黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysospor ium)是一类腐生真菌，该菌在一些主要营养物(如 氮、碳、硫)受到限制时形成的木质素降解酶系对各种异生物质具有独特的降解能力[1,2]. 20 世纪80 年代以来的研究表明，该菌对底物的氧化具有高度非特异性的特点，可以降解多种有机物，包括 天然高聚物、还原性化合物、氧化性化合物、有毒化合物等. 黄孢原毛平革菌合成的木质素降解酶系中起主要作用的有两种酶：木质素过氧化物酶(Lignin Peroxidase, LiP)和锰过氧化物酶(Manganese Peroxidase, MnP). 它们合成后被分泌到胞外，经H2O2 启动一系列自由基链反应，依靠氧化还原反应降解各种结构各异的有机物. 虽然整个酶系对底物的 氧化是高度非特异性的，但LiP 和MnP 对不同结构底物的降解能力存在差异[3,4] ，一般地，LiP 主 要催化降解非酚类底物，而MnP 主要催化降解酚类、胺类等底物. 本研究对培养基中氮源浓度、Mn2+浓度和氧的供应等影响产酶的关键条件进行研究，以期确 定选择性合成LiP 和MnP 的条件. 2 材料与方法 2.1 菌种及培养条件 菌种：黄孢原毛平革菌WX213 ，由江南大学生物工程学院微生物实验室提供. 基本培养基(g/L)[5] ：葡萄糖 10，酒石酸铵0.2 ，苯甲醇0.54 ，MgSO 0.71 ，吐温80 1.0，KH PO 4 2 4 2.56 ，VB 0.001 ，邻苯二甲酸缓冲液10 mmol/L ，微量元素液70 ml ，pH 调节为4.5. 1 微量元素液(g/L) ：氨基乙酸0.6 ，MnSO ⋅H O 0.5，NaCl 1 ，FeSO ⋅7H O 0.1，CoSO ⋅7H O 0.22 ， 4 2 4 2 4 2 CaCl ⋅2H O 1.56, ZnSO ⋅7H O 0.1, CuSO ⋅5H O 0.1, AlK(SO ) ⋅12H O 0.01, HBO 0.0 1, 2 2 4 2 4 2