XPD对SMMC-7721肝癌细胞中DNp73和GADD45β的调控及意义.pdf

摘要 4IIIIIIII IIIIIIUlIIIIIIIII 摘要 Y2427226 目的： 通过将着色性干皮病D组基因(XPD，xerodermapigmentosumgroupD)转染 表达变化；以及对人SMMC．7721肝癌细胞生长和凋亡的影响。 方法： 1、用含10％胎牛血清的1640培养液培养SMMC一7721肝癌细胞，并置于37℃、 5％C02的孵箱内培养。 和空白对照组，转染后在倒置荧光显微镜下观察转染结果。 Leader3．0图像 XPD、DNp73、GADD45fi在各组细胞中的RNA表达水平：用Band 分析软件进行灰度分析。 4、收集各转染组及空白对照组SMMC．7721肝癌细胞，提取蛋白并利用 One图像分析软件进行灰度分析。 Quantity 5、利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的细胞增殖力。 6、利用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率：四组细胞经0．25％胰酶消化后采 用AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒进行流式细胞仪检测。 7、运用SPSSl3．0进行分析，用均数4-标准差表示资料，单因素方差分析用 于组间比较，LSD检验用于两两比较。 ’ 结果： 1、转染：显微镜下见N2组和XPD组的细胞中有绿色荧光蛋白(GFP)的表 达，然而空白组和脂质体组的细胞则未见表达。 于其他三组，而DNp73的mRNA表达量低于其他三组，差异有统计学意义(P O．01o 摘要 照组之间差异无统计学意义伊0．05)。 3、Western 于其他三组，DNp73的蛋白表达量低于其他三组，差异有统计学意义(P0．01)。 无统计学意义(P0．05)。 4、MTT法检测细胞增殖活力：XPD组的细胞增殖力明显低于其他三组，差 异有统计学意义(P0．01)。 5、流式细胞仪检测细胞凋亡率：转染pEGFP．N2．xPD重组质粒的细胞凋亡 较其他三组显著，凋亡达56．53％，差异有统计学意义(P0．01)。 结论： XPD具有抑制人肝癌细胞增殖和促进其凋亡的作用，其作用机制之一是通 过抑制癌基因和促进抑癌基因的表达实现的。本研究发现癌基因DNp73随XPD 的表达增加而减少，相反，抑癌基因GADD4513的表达随XPD的表达增加而增加； 故推测两者在XPD基因抑制人肝癌细胞生长的调控过程中发挥重要作用。 关键词：肝癌；XPD基因；GADD4513基因；DNp73基因；转染 Abstract ABSTRACT Aim： and ofGADD45betaand ToevaluatethemRNAs DNp73 proteinsexpressions transfected humanSMMC．7721 carcinomacellsthathavebeen i11 genes hepatoma 、vithXPD．Andobservethe ofXPDontheSMMC-7721 cell and impact proliferation apoptosis． Methods： 1．SMMC．7721 cellswereculturedinPRIM一1640