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i vi n体外转染人髓核细胞的生物学效应
慢病毒介导Surv
摘要
目的：研究慢病毒介导的生存素(SurVivin)基因在体外转染人退变椎间盘髓核细胞
的生物学效应。
方法：取腰椎间盘突出症患者手术切除的髓核组织，应用细胞培养技术获得人髓核
细胞；用含有Sun，ivin基因的重组慢病毒载体转染人退变髓核细胞作为实验组，阴
PCR
性对照组转入等量的空病毒颗粒，空白对照组加入等量的PBS；通过Real。Time
胞仪检测退变髓核细胞的凋亡率；应用Caspase．3活性检测试剂盒，通过酶标仪检测
髓核细胞裂解液中Caspase．3的酶活性。
结果：原代髓核细胞培养7天左右开始贴壁增长，髓核细胞呈多角形，可见长短不
一的突起结构，细胞核呈圆形，核中可见2—3个圆形的核仁，培养30天左右细胞达
转染后1周左右可到达90％融合，细胞的增长和细胞形态无明显改变；在传代之后
髓核细胞增长减慢且细胞形态发生改变，胞质浓缩，细胞体积变小，细胞突起变细
mRNA的
变长；髓核细胞在转染后1周，Real．TimePCR结果显示实验组Survivin
Caspase一3吸光度检测结果实验组为(0．1
白对照组(0．099士0．01)，三组组间比较差异无统计学意义(P0．05)。
结论：(1)慢病毒介导的Survivin基因在体外成功转染人退变髓核细胞并且获得过表
达；(2)慢病毒介导的Survivin基因转染人退变髓核细胞后引起髓核细胞增长减慢及
细胞形态学的改变，对髓核细胞的凋亡无明显抑制作用。
硕士研究生：赵亮(外科学)
指导教师：张国庆教授
关键词：慢病毒属；Survivin；椎间盘退变；细胞凋亡；基因治疗
effectsoflentiviral-mediatedsurvivintransfectioninhuman
Biological
nucleus invitro
degenerativepulposus
Abstract
the of
Objective：Tostudy effects Survivin lentivirusto
biological transforminggeneby
human intervertebraldiscnucleus cellsinvitro．
degenerative pulposus
Methods：To
obtainhumannucleus cellculture
pulposus(NP)cellsby
Lenti—SurtotransfecttheNP blanklentivirustotransfect
cells(experimentalgroup)，used
the control andtheblankcontrol withPBS．The ofthe
negative group group expression
Survivinwas cells
gene analyzed Real-TimePCR．The rateoftheNP
byusing
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