六味地黄丸对MPTP帕金森病小鼠多巴胺神经元的影响.pdfVIP

湖北中医杂志 2009年第31卷第4期 · 6 · HubeiJournalofTCM Apr．2009．Vo1．31，No．4 六味地黄丸对 MPTP帕金森病小鼠多巴胺 神经元的影响 周素方，钱红雨 、 (湖北中医学院f临床医学院2006级硕士研究生，湖北 武汉430065) 摘 要：目的 观察六味地黄丸对 1一甲基 一4一苯基 一1，2，3，6一四氢吡啶 (MPTP)致帕金森病 (PD)模型小 鼠异常行为和多巴胺能神经元的保护作用。方法 将50只小鼠随机分为5组，即正常对照组 (A)、模型组 (B)、美 多巴组 (C)、六味地黄丸组 (D)、美多巴加六味地黄丸组(E)。经腹腔注射MPTP建立帕金森病模型小鼠，观察各组 药物对模型小鼠异常行为表现的影响，并应用免疫组化法测定各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶 (TH)阳性细胞数量的 变化。结果 模型小鼠在行为学和免疫组化检测方面都有显著异常，给药4周后，c、D、E组之间比较无显著差异。 结论 六味地黄丸对MPTP诱导的PD模型小鼠黑质多巴胺神经元有保护作用。 关键词：帕金森病；实验研究；六味地黄丸；酪氨酸羟化酶 中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：1000—0704(2009)40 —0006—02 帕金森病(PD)是一种进行性神经系统退行性疾病，主要源 1．2．2 模型制备 于中脑黑质致密部多巴胺(DA)神经元退行性变，导致的DA与 以无菌生理盐水溶解 MPTP后，按25mg／kg的剂量给小鼠 乙酰胆碱(Aeh)平衡失调。酪氨酸羟化酶 (TH)是 DA合成的限 腹腔注射，每 日1次，连续5天 。 速酶，PD动物模型和患者体内TH从基因表达到酶蛋白含量及 1．2．3 给药 酶的活性都有广泛的异常改变…。TH含量与功能不足是导致 各给药组根据药理学方法计算小鼠给药量…，按照每次灌 PD一系列临床症状的重要环节。 胃量0．5mL配制；正常对照组、模型组给予灌 胃等体积生理盐 1 材料与方法 水。均每 日1次 ，连续4周。 1．1 材料 1．2．4 行为学实验 1．I．1 药物：六味地黄丸由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯 5组小鼠分别进行爬竿实验 和滚筒实验 以检测其肢体 苓、泽泻六味中药组成，按一定工艺煎煮为汤剂。美多巴，上海 运动协调情况。 罗氏制药公司产品，批号：SH0607。 1．2．5 脑组织的采集与处理 1．1．2 动物：C57BL小鼠50只，雄性，体重2O一25克，由武汉大 各组小鼠经戊巴比妥麻醉后，开胸暴露心脏，从左心室插入 学动物实验中心提供 ，动物合格证号：SCXK(鄂)2003—0004。 灌流针并固定，剪开右心耳，用生理盐水和4％多聚甲醛固定液 1．1．3 主要试剂 ：MPTP，酪氨酸羟化酶 (TH)抗体。 进行灌注。灌注完后，冰上取脑 引。取出脑组织于固定液 中过 1．2 方法 夜，在中脑黑质部进行冠状连续切片。照试剂盒说明进行TH免 1．2．1 动物分组 疫组织化学染色。