RNAi抑制水通道蛋白5表达及其对细胞株黏蛋白合成及分泌影响.pdfVIP

；9。 毛曼蓄煮j慧鬯zoosⅢ娜㈩ RNAi抑制水通道蛋白5表达及其对 细胞株黏蛋白合成及分泌的影响 陈智鸿 高 磊 祝 蓉 白 莉 白春学6 (复旦大学附属中山医院肺科上海20()032) 【摘要】 细胞株黏蛋白合成、分泌的变化。方法 在转染后7d内的不同时点收集细胞，检测AQP5mRNA和蛋白的变化。用G418筛选稳定转染细胞株，用 western MUc5AC表达量的变化。结果siAQP5及shAQP5转染24h对AQP5mRNA的抑制率分别为65％、79％。 对蛋白的抑制在转染后第7 ELISA显示瞬转第5 G1，G2，G3，A1，A5)MUC5AC的合成和分泌分别增加59％～156％及33％～166％。结论化学合成及质粒介 导的RNA干扰法均能有效抑制SPC—A1细胞AQP5的表达，后者较前者更经济。抑制效应更优。与瞬时转染比 较，稳定转染可长时间抑制特定基因的表达。AQP5抑制后。细胞株黏蛋白的合成、分泌增高。 【关键词】 RNAi；siRNA；shRNA；AQP5；黏蛋白； 稳定转染 【中图分类号】Q74 【文献标识码】A Inhibitionof RNAiandits AQP5 expressionby effectonmucjn andsecretiOn synthesis CHEN Lei，ZHU Li，BAIChu”xue△ Zhi—hong，GA0Rong，BAI 20lJ()32，C^i打口) (P趣Z力哩。竹n，≯DP户口rf，“P行f。Z^o挖gs．Il口行Hospif口Z，F摊c如行Lki钉P，1ffy，S．IlⅡ玎g^4i the Inthis to whether of 【Abst豫ct】Obj∞tive experiment，weattemptedinvestigate expression couldbeinhibitedRNAi to effects the3 AQP5 and amongmethods， by transientlystably，andcompare SPC—A1 andtheeffectof onmucin andsecretion．Methods cellswere AQP5genesilencing synthesis transfectedwith RNA． werecollectedat firstly synthetic。siRNAorvectord“venhairpin Then，cells differenttimeswithin7 mRNAand levelof weredetected days，and protein AQP5 usingquantitative r