抗人大肠癌单克隆抗体ND-1的基因工程双价单链抗体的构建、表达及活性检测.pdfVIP

成，从而使抗体分子在获得双结合能力的同时也增加了分子量，这样既有利 于提高抗体的亲和活性又能改善其在体内清除过快的缺点。ND一1se(Fv)： 的构建为进一步的体内荷瘤裸鼠实验及大肠癌临床放免显像和治疗提供了 实验依据。 实验材料与方法 利用ND．1 pMDl8-T 序列，即pET一28a(+)ND一1 度、时间及温度等诱导条件，通过SDS—PAGE确定最佳诱导条件，以最佳诱 NTA 泳测定其分子量及纯度分析，间接免疫荧光显微法检测其与培养中人大肠 1seFv，ND一1 se(Fv)：及ND一1MAb之间的亲和活性。 实验结果 利用ND-1 相符。将质粒pMDl8一THnker—ND一1 ．2． IIL／EcoR BL21，挑单菌落提质粒，以Hind I双酶切 连接，转化感受态E．coli 1 0．5mM、3小时可作为最佳诱导条件。以最佳诱导条件诱导表达后获得包 90％，分子量与预测分子量55kDa相符。蛋白经复性后对大肠癌细胞系 讨 论 scFv 串联基因序列的Linker序列，和基因拼接所须的限制点，通过与ND-1 表达载体ND一1scFv基因下游相应限制点双酶切拼接，从而有效地构建了 NI)．1单抗的双价单链抗体ND一1se(Fv)：的表达质粒。ND一1sc(Fv)：在大肠 杆菌BL21菌株中通过诱导获得了高表达，约占细菌总蛋白的16．5％。ND一 柱纯化获得浓度1．3mg／ml纯化蛋白。经复性后，细胞免疫荧光试验显示， 显示，ND—l St(Fv)：对CCL一187细胞的亲和恬力显著高于ND一1scFv(P 本达到预期的生物学特性，为接下来的体内实验建立了良好的基础，其有 可能成为人大肠癌的放免显像和治疗的良好载体。 结 论 本研究成功构建了抗人大肠癌基因工程双价单链抗体ND一1sc(Fv)：， 大肠癌的放免显像和治疗的理想载体。 关键词：双价单链抗体；大肠癌；ND-1 ·3· of Bivalent andCharacterization Construction，Expression ChainFvof·theND-1Monoclonal Single Antibody Carcinoma Colorectal Against carcinomais oftlleeomInon Wmorswhichhave Colorectal one malignant inour and fourth thedeathrate the country incidence，occupyingplace higher