人参皂苷Rb-%2c1-水解酶的分离纯化及其性质的研究.pdfVIP

为了确定纯化的条件，本实验比较了数种分离纯化的方法：1、硫酸铵盐析与 乙醇沉淀法处理量大，但分离纯化效果不佳；2、DEAE—sepharose离子交换层析、 HA层析和凝胶过滤层析对SE酶均有较好的分离效果。3、DEAE离子交换层析和sE 酶糖苷酶荧光活性染色结果显示，SE酶中至少含有7种以上糖苷酶的同功酶；HA 层析结果显示目标酶是中性或酸性蛋白质。 在上述工作的基础上，我们设计出一套合理而可行的实验方案，通过 SephadexG一100凝胶过滤层析三种方法的联用将SE酶中能够水解人参皂苷Rb。的 永解酶分离和纯化至SDS—PAGE上呈单一蛋白质条带，并通过活性染色证实。应用 SDS—PAGE和凝胶过滤层析对分子量的测定，提示该酶是由4个分子量为110~115KD 的相同亚基组成。 最终，我们对纯化的目标酶进行基本酶学性质的分析：1)目标酶的最适pH 值为5．6，最适温度是80℃。pH稳定范围报广，在口H4．0的溶液中和温度60℃ 以下保持长时间稳定状态，是一个耐碱和中等耐热的糖苷酶。2)目标酶对Na+、 K+、Li+、ca2+、 mM和O．189 双倒数做图法，pNPG为底物的动力学参数Km和Vmax分别为O．182 rnM和lO．192 umol／rnin，mg：以Rbl为底物的动力学参数}：m和Vmax分别为O．790 umol，m甜mg。4、在本实验条件下，Rbl的酶经时作用中只监测到产物Rd的存在， 该结果的意义还需要进一步验证。 本实验从SE中分离纯化出一种新型、高效水解人参皂苷Rb，的B一葡萄糖苷 酶，为天然人参皂苷和其它天然糖苷类化合物的生物转化产物的发现、开发和应 用提供有效的工具并奠定了基础工作。 B—葡萄糖昔酶糖昔类化合物 关键词：人参皂苷Rb。人参皂苷cK Puri6cation andCharacterizationof aGinsenoside—RblB-G1ucosidase Hydrolyzing M私ter’s Candidate：LiuXin Cui Advisor：ProfessorYu AdVisOr Committee：PrOfessor Yang LiⅡg Major：Pathog锄icBioIogy ABSTRACT Ginsenoside shon， compound-K[20(S)一B·D—glucop”anosylpmtopaIlaxadiol，for hnd of ame诅b01ite C—K]，a non-n咖rally c锄e舶m 0cc嘶ng百nsengsaponin，is suchas aIld natIlrallyoccumng Rb】 Rb2 protopallaxadiol一啪eginsenosides