不同诱导培养条件对重组绵羊β_2-AR第二细胞外环在大肠杆菌中表达的影响.pdfVIP

新疆农业科学 2009，46(6)：1345—1350 XinjiangAgriculturalSciences 不同诱导培养条件对重组绵羊 』32一AR第二细胞 外环在大肠杆菌中表达的影响 陈小平，张慧玲，杨 斌 ，韩 冰，陈 勇 (新疆农业大学动物营养实验室，乌鲁木齐 830052) 摘 要：【目的和方法】研究对不同诱导时间、诱导剂 IFrIG’终浓度、培养温度和振荡培养箱转速等4个诱导培 养条件对绵羊 一肾上腺素能受体(陉一adrenoeeptor， 一Art)第二细胞外环重组质粒pEq32C—AR／Se在大肠 杆菌BI2t(DE3)中表达水平的影响进行了研究，以筛选其最佳培养条件。【结果】随着 诱导时间的延长， 重组绵羊 一AR第二细胞外环的相对表达量逐渐增加，在2h时相对表达量达到最大值 ，为菌体总蛋白的 30．1％。IPw 终浓度在 0．01—2mmol／L时，重组绵羊 一All第二细胞外环的相对表达量水平均在 27％一 30％；当WIG终浓度为0．01nunol／L时，重组绵羊 一All第二细胞外环的相对表达量最高，占菌体总蛋白的 3O．5％。在设嚣的4个诱导温度中，25℃时重组绵羊一APt第二细胞外环的相对表达量最高，占菌体总蛋白 的35．5％。在振荡培养箱不同转速条件下，重组绵羊 一AR第二细胞外环的相对表达量在 33％～40％波动； 在200r／min时，相对表达水平最高，为细菌总蛋白的40．0％。 【结论】绵羊 隆一AR第二细胞外环基因在大肠 杆菌中的表达最佳条件为 ：重组菌株在 LB液体培养基中生长至OD6oo0．5左右时，加入 至终浓度0．01 nmM／L，于25℃、200r／rain诱导 120min。 关键词：绵羊； 一肾。上腺素能受体；第二细胞外环；诱导表达；大肠杆菌 中图分类号 ：S188；S826 文献标识码：A 文章编号 ：1001—4330(2009)06—1345—06 EffectsofDifferentInducedCultureConditionsonExpressionofthe SecondExtracellularLoopofSheepB2一adrenoceptorinE．coli CHEN Xiao—ping，ZHANGHui—ling，YANGBin，HAN Bing，CHEN Yong (LaboratoryofAnimalNutrition，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052，China) Abstract：【ObjectiveandMethod]Theaimofthispaperwasdesignedtostudytheeffectofdifferentinduced time，inducde doseW IG finalconcentration，culturetemperature，rotationspeedofshakeronhteexpressionlevelof sheepf；2一adrenoceptorgene，thesecondextracellularlooprecombinantplasmidpET32C—AR／Seharboringin ordertoselectandscreenthebestcultureconditions．【Result]TheresultsshowedthatalongwithprolongingofI℃ inductiontime，therelativeexpressionleveloftherecomb innatproteinincreasedgraduallyandreachedthepeak2h later，countingfor30．1％ ofthe totalbacterialprotein．Theexpression levelofhterecomb innatproteinwas between27％ ～30％ oftotalbacterialproteinwhe