膜糖蛋白PC-1基因K121Q多态性与2型糖尿病的相关性研究.pdfVIP

2lQ多态性是否存在关联，进一步 尿病与膜糖蛋白PC一1基因Kl 从分子水平探讨汉族人2型糖尿病的发病机制。 ／方法：研究对象包括无血缘关系的2型糖尿病患者107例， I 同时选择性别、年龄与病例组相匹配的正常对照者92例。所有 入选对象均测身高、体重、腰围、臀围、血压，并查空腹血糖、 空腹血浆胰岛素、空腹血脂水平等各项指标，留取外周全血1ML 用2％EDTA抗凝保存。以标准苯酚一氯仿抽提法抽取外周金血白 细胞中的基因组DNA，应用特异引物以聚合酶链反应(PCR)扩 增目的基因片段，然后利用限制性片段长度多态性(RFLP)的 方法用hva II限制性内切酶对PCR产物行酶切反应，将酶解产 物在2．5％葡聚糖凝胶中进行电泳分析，于凝胶成像分析系统内 观察结果判读基因型，计算基因型及等位基因频率，并作相应 统计分析。 结果：1、中国人与白种高加索人之间PC一1基因型(KK、 KQ、QO)频率、等位基因频率(K、Q)分布无显著性差异(P0．05)； 2、本文所有研究对象中只见到两种基因型(KK及KQ)，未发现 等位基因Q的纯合子(QQ)。糖尿病组的KQ基因型频率及Q等 位基因频率均高于对照组，且两者比较有显著性差异(P值分 别小于0．0001及0．01)；3、Q等位基因与体重指数、收缩压、 舒张压、空腹血糖、空腹胰岛素、血浆甘油三酯、血浆总胆固 醇、胰岛素敏感指数存在相关关系(PO．001～0．05)；4、2型 糖尿病组中KQ基因型患者的体重指数明显高于I【K型(PO．05)， 且Q等位基因携带者的肥胖发生率明显高于非Q等位基因携带 者(PO．05)；5、影响2型糖尿病发病的主要危险因素有空腹 胰岛素水平、KQ基因型、血浆总胆固醇水平及体重指数。1／ 结论：2型糖尿病患者的Q等位基因频率明显高于正常对 照者，两者比较有显著性差异，并在一定程度上与肥胖、高血 压、血脂代谢及胰岛素抵抗相关联。 关键词：膜糖蛋白PC-I基因多态性2型糖尿病限制性片 段长度 结 果 一、2型糖尿病组和正常对照组的临床和生化特征比较(表1) 表1为2型糖尿病组和正常对照组的临床和生化资料比 较。两组间年龄和性别差异无显著性，具有可比性。糖尿病组 ，与对照组比较，糖尿病组的体重指数、腰臀比、收缩压、舒张 压、空腹血糖、空腹胰岛素、血浆甘油三酯、血浆总胆固醇、 血浆低密度脂蛋白胆固醇水平均高于对照组，胰岛素敏感指 数、血浆高密度脂蛋白胆固醇均低于对照组，经t检验，差异 有显著性(P0．001～0．01)。 二、中国人与白种人2型糖尿病患者中PC-1基因K121Q多态基 因型及等位基因频率比较(表2) 编码PC-1基因外显子Exon4的密码子121位的功能性氨 基酸变异(赖氨酸一谷氨酰胺)，形成K121Q多态。具有多态性 变化的人群，其PC-1基因第四外显子第121位密码子由A(腺 嘌呤)转换为C(胞嘧啶)，剡此处出现hvaII内切酶的酶切位 点。 多态的两种等位基因K及O。从理论上讲，扩增产物经hvaⅡ 内切酶酶切后，在电泳上应出现三种情况：①无多态性变化缺 38bp片段，基因型为I【K， 乏AvaII内切酶酶切位点者只出现2 无Q等位基因；@DNA双链均有多态性变化时则出现148bp和 90bp两条带，基因型为QQ，为Q等位基因的纯合子；③DNA双 链中只有一条链出现多态性改变时，电泳后显示238bp、148bp 和90bp三条带，基因型为KQ，为等位基因Q的杂合子。我们 在所研究的107例2型糖尿病和92例正常对照组中只见到两种 基因型，即KK及KQ(图2及图3)，未发现等位基因Q的纯合 子(基因型为QQ)。其中以KK基因型最多见，基因型频率符合 Hardy—Weinborg平衡。等位基因则以K为主。与白种人资料比 较，白种人也以基因型KK、等位基因K为主，本实验中中国 人Q等位基因频率略高于白种高加索人、KQ基因型频率略低于 白种高加索人，但经X2检验，中国人与白种高加索人之间Pc一1 基因型(KK、KQ+QQ)频率(X 2=1．871，P=0．171)、等位基因(K、 Q)频率(X2=3．754，P=0．05