应用细胞芯片捕获人肿瘤细胞并检测其细胞表面CD抗原表型的表达.pdf

·中文论著摘要· 应用细胞芯片捕获人肿瘤细胞并检测其细胞 表面CD抗原表型的表达 目 的 肿瘤标志物(tumormarker，TM)，是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细 胞所产生或分泌并释放到血液、体液中，反映肿瘤存在和生长的一类物质。肿瘤 标志物可以分成以下几大类：①肿瘤胚胎性抗原；②酶和同工酶；③血浆蛋白； ④细胞代谢产物；⑤肿瘤抗原；⑥癌基因和抑癌基因蛋白产物及微量元素。肿瘤 抗原(tumor antigen)泛指在肿瘤发生、发展过程中新出现或者过度表达的一些抗 原物质。 免疫应答过程有赖于免疫系统中细胞间的相互作用，一种是通过细胞间的直 接接触，另一种是通过分泌细胞因子或其他活性分子而介导的相互作用。细胞表 面功能分子是免疫细胞之间相互识别的物质基础，包括细胞表面的多种抗原、受 体和其他分子。应用单克隆抗体鉴定为主的方法，将来自不同实验室的单克隆抗 体所识别的同一分化抗原决定簇，统称为CD(cluster 究者研究发现，正常细胞和肿瘤细胞所表达的CD抗原不同，并且CD与肿瘤的 发生发展有着密不可分的联系。 本课题研究制备的细胞芯片就是用来高通量检测细胞表面CD抗原的表达情 况。将六十四种CD抗原单克隆抗体固定于载体上，首先形成抗体点阵，随后利 用抗原、抗体特异性结合的原理，不同的单克隆抗体能够自动识别和捕获表达相 应表面分化抗原的细胞，从而检测多种肿瘤细胞表面相应CD表型的表达情况。 细胞芯片技术可快速地分析正常与癌细胞表面CD抗原表型的差异，不仅有助于 肿瘤发病机制的阐明，还能筛选肿瘤细胞CD抗原表型标志物，在肿瘤的发生机 制研究、诊断和治疗方面，具有广阔的应用前景。 方法 1、细胞培养 培养9种细胞备用，人正常胃粘膜细胞系GES．1、人胃腺癌细胞系7901、人 正常肝上皮细胞系L．02、人肝癌细胞系Bel7404、人胰腺癌细胞系PANC．1、人小 细胞肺癌细胞系H446、人大细胞肺癌细胞系H460、人肺腺癌细胞系A549和人大 肠癌细胞系HT29； 2、应用细胞芯片捕获肿瘤细胞并检测其细胞表面CD抗原表型的 表达； 3、验证细胞芯片检测肿瘤细胞表面CD抗原表型表达的特异性； Chain (1)应用RT-PCR(Reverse Reaction)方法验 Polymerase Transcription 证细胞芯片对人正常胃粘膜细胞系GES．1、人胃腺癌细胞系7901和人胰腺癌细胞 系PANC．1细胞表面CD抗原表型的检测结果； (2)基因测序验证人正常胃粘膜细胞系GES．1、人胃腺癌细胞系7901细胞 表面CD抗原表型表达的RT-PCR扩增结果； (3)应用流式细胞术验证细胞芯片捕获细胞的特异性； 4、细胞芯片阳性点荧光标记CD的筛选。 勿士 毋 ‘ 二口 木 2 CD77、CDl33、CDl03、CD64抗体点捕获到人胃腺癌细胞系7901细胞。 2、RT-PCR检测人胃腺癌细胞系7901和人正常胃粘膜细胞系GES．1CD表型 检测人胰腺癌细胞系PANC．1 表达，与我们的细胞芯片检测CD表型的结果相一致。 3、应用流式细胞术的方法，检测人胃癌细胞系7901与人胃正常细胞系GES．1 细胞表面CDl5、CD24、CD44的表达，流式结果显示与我们的细胞芯片检测CD表 型的结果相一致。 佳细胞芯片阳性标点，结果发现PE．CDl3效果最好。 ：口结论◆己 胞肺癌细胞系H446细胞、人大细胞肺癌细胞系H460细胞和人肺腺癌细胞系A549 细胞；CDl3、CD95抗体点捕获到人小细胞肺癌细胞系H446细胞和人大细胞肺癌 细胞系H460细胞，未捕获到人肺腺癌细胞