雷竹成花基因PvFT全长克隆及其表达规律研究.pdfVIP

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第五届中国竹业学术大会论文集 第二部分 竹类生物学基础 雷竹成花基因PvFT 全长克隆及其表达规律研究 王弋 郭小勤 林新春 方伟 (浙江林学院 浙江省现代森林培育技术重点实验室 浙江 临安 311300) 摘要:FLOWERING LOCUS T 基因在植物成花决定过程中起到重要作用,它所编码的蛋白能够与 FD 蛋 白相互作用,引起下游 SOC1 、AP1 等基因表达进而促进花器官形成与分化。本研究中,我们利用同源 克隆及 RACE 技术对雷竹 FT 同源基因进行克隆,获得了该基因全长并将其命名为PvFT 。序列分析显示 该基因含有 4 个外显子和 3 个内含子,其序列与水稻、小麦、玉米等植物中的 FT 同源基因有很高的相 似性。另外还利用 RT-PCR 检测了 PvFT 的昼夜表达情况,结果显示PvFT 的表达具昼夜变化规律,这表 明雷竹PvFT 基因可能受到光周期途径调控。 关键词:FLOWERING LOCUS T 昼夜表达 光周期途径 营养生长向生殖生长转变的过程是植物发育的重要阶段,在合适的时间开花能够使植物更好的进行 繁殖并延续种群。植物中有多种途径能够感知外界环境的各种因素并实现开花时间的精确调控[1] 。光周 期途径是拟南芥、水稻等模式植物开花途径中研究的最为详细的一条途径。 利用拟南芥开花突变体,已克隆到多个参与光周期途径的开花基因[2] ,CONSTANS(CO)[3] 和 FLOWERING LOCUS T(FT)[4、5]便是其中的两个重要成员。在光周期途径中,CO/FT 模块能响应不同光 周期条件,并调控拟南芥开花时间 [6] 。CO 是第一个被克隆的能影响植物开花时间的基因,它能感受上 游生物节律钟产生的生物节律,并做出反应。CO 在上游生物节律钟和下游开花基因之间起到桥梁作用, 它的节律性变化是光周期调节拟南芥开花的分子基础。CO 直接作用的靶基因是 FT ,FT 是一个成花途 径整合因子,长日照下 CO 通过上调 FT 基因表达促进拟南芥开花。 目前认为,是FT 蛋白而不是FT mRNA ,促进拟南芥开花[7] 。通过转基因上调或下调FT 表达,能 明显的促进或抑制拟南芥开花,它是开花的直接促进因子[8-11],在成花过程中起到重要作用。FT 在叶片 、 中生成,通过韧皮部运输至茎尖[8 9] ,在茎尖,FT 与 bZIP 转录因子 FD 形成复合体,并激活 SUPPRESSION OF OVEREXPRESSION OF CO 1(SOC1) 和 APETALA1 (AP1)[12、13],进而促进下游花序分生组织和花器官 [14-17] 基因表达。FT 基因的保守性很高,是植物开花的通用信号,因此,FT 被认为是“成花素” 。 雷竹(Phyllostachys violascens )属竹亚科刚竹属,它每年都会出现开花现象,且从2-12 月份均会开 花。因此,雷竹可以作为研究竹类开花的一个突破口,对竹类开花机理进行研究。FT 作为开花时间决 定基因,在植物开花过程中起到重要作用,因此,我们选取 FT 基因作为研究对象,希望能够初步了解 雷竹的开花机理。 1 材料与方法 1.1 植物材料 本实验所用材料均采自于浙江林学院翠竹园。从 2009 年 1 月 15 日至3 月 8 日,每隔十天采集一次, 共采集 6 次。2009 年 8 月 13 日,从上午8:30 开始,每隔三小时采集一次,共采集 8 次。 1.2 DNA 及 RNA 提取 1.2.1 DNA 提取:采用改良 CTAB 法。 1.2.2 RNA 提取:采用 CTAB 法。 1.3 雷竹 FT 基因克隆 1.3.1 cDNA 片段扩增 利用水稻、玉米等禾本科植物 FT 同源基因保守结构域,设计一对特异引物。以雷竹开花前后 6 个 83

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