慢性乙型肝炎中医分类与外周血树突状细胞功能关系的研究.pdfVIP

慢性乙型肝炎中医分类与外周血树突状细胞功能关系的研究 王磊‘2 冯晓霞。2 张玮2 邢练军1’2 郑培永1 季光 1上海中医药大学附属龙华医院消化内科上海中医药大学脾胃病研究所(200032) 2上海中医药大学附属龙华医院肝科(200032) (摘 要) 目的：研究慢性乙型肝炎(ChronicHepatitisB，CHB)患者不同中医分类(证候类型)与外周血树 突状细胞(dendriticcell，DC)表型及功能的关系。 方法：慢性乙型肝炎患者60例，中医证候分类符合脾虚肝郁类(A)、脾虚。肾虚类(B)、脾虚湿热类 胞仪测定DC表型，ELISA法测定DC分泌IL一10含量，同步检测患者肝功能及HBV—DNA水平。 结果：CHB患者DC体外诱导增殖能力较正常人下降，Dc成熟表面标记物显著低于正常人(P(O．05)； 其中B类DC培养上清中IL一10含量显著高于A类(尺0．05)。 结论：在CHB发病过程中，中医不同证候分类患者DC的表型及功能存在差异，提示中医证候分类与 机体免疫功能之间存在一定相关性。 关键词：慢性乙型肝炎：树突状细胞；中医证候分类 cell，APC)，其功能状态直接影响细胞和体 DC是人体内功能最强的抗原提呈细胞(antigenpresenting 液免疫应答，大量研究显示CHB患者存在不同程度的免疫耐受，特别是存在Dc功能缺陷，而健脾类中药可 改善慢乙肝患者DC功能，提高机体免疫。我们推测以脾虚为主的不同中医证候分类之间可能存在DC活性 的差别，本研究旨在研究不同中医证候分类慢乙肝患者Dc表型及功能差异，为中医药抗HBV的适应证候、 治疗时机的选择提供临床证据。 资料与方法 l对象 健康志愿者10名为上海中医药大学附属龙华医院职工。CHB患者60例，来自上海中医药大学附属龙 断标准参照2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》 的标准。中医证候分类标准参照《中药新药临床研究指导原则》及《中医诊断学》五版教材，专家制定脾 虚肝郁类(A类)、脾虚肾虚类(B类)、脾虚湿热类(C类)的判别标准。入选病例均为半年内未接受免疫 ·22· 调节治疗的病入。 2试剂仪器 淋巴缨蔻分离液(Ficoll，1．077 1640培养基购 g／m1)购鸯上海华精生物骞限公司；双抗培养液RPMI humaninterleukinrh， colonystimulatingfactor，GM-CSF)，重组人瞧分素4(recombinant macrophage HLA-DR—APc单克隆抗体购自美国BD公司；FACSClibur流式细胞仪为美国肋公司产品；是微照相系统为 丑本Olympus公司产品。 3方法 海艾迪壤医学检验中心完成。 BloodMononuclear 3．2单个核细胞(Peripheral 抗凝(40U／m1)，密发梯度离心法获取攀个孩缍戆，无盘清RPMI1640悬浮沉淀纲腿、诗数，调整缁熬浓度 到(2-6)×i06／ml，鬣于6孔板中，37V、5％CO：温育2h，去除未贴壁细胞，获得单个核细胞。 3．3 1640清洗3次，加入10％胎牛血清RPMI1640培养液，rhGM-CSFlOOng／ml和rhIL一4lOOng／ml终浓度加 入细胞因子，37。C、5％C02培养，隔曰半量换液1次(含细胞因子rhGM—CSF50ng／ml，rhIL一450ng／m1)， 第5天字}鸯羹零耀一a(100ng／m1)，共壤养7d，收集茂。 3．4 Dc形态观察：于第1，3，5，7灭倒置相差驻微镜观察DC的形态特征，扫描电镜观察成熟Dc形态。 3．5 }lLA一涨的表达永平。 3．6 含量。按照试裁盒提供麴操佟步骤进于亍。