霉酚酸产生菌发酵培养条件的研究.pdfVIP

霉酚酸产生菌发酵培养条件的研究 石英恭晓兰董悦生路新华任晓张掌丁彦博刘梅单越琦贺建功 (华北制药集团新药研究开发中心微生物药物国家工程研究中心石家座050015) 攘要本试验对霉酚酸产生菌覆有的发酵配方中的碳濠、氮源、pH、磷酸盐等培养条俘进行了 详细的实验优化，并应用正交实验方法，得到了霉酚馥的最佳发酵条件。实验结粜得到发酵培 养基醚比：乳糖2％，葡萄糖1．5％，蛋白胨1．o％，酵母粉1．5％，KH2P040．02％，(NH4)2S04 O．2％，氯化钠O。2％，碳酸钙O．2％。初始pH6．5。在此培养条件下，霉酚酸的发酵单位提高了 95．2％。 关键词抗代谢类免疫抑制剂、培养基、发酵、霉酚酸、正交实验 抗代谢类免疫猕黼帮霉酚酸酯(Mycophenolate 悉(CellCept)，含有活性成分霉酚酸(MPA)，它是～种高选择性、非竞争性、可逆性的次黄嘌 岭核蒋磷酸脱氢酶(啪H)抑制剂，可抑制鸟嘌呤核菅酸的经典合成途径。与硫唑嘌呤(Aza)、 环孢藏素A(CsA)相魄，MMF无明显肝、臂毒健。诲多器害移德中心已将MMF作失预防和 治疗慢性排斥反应的首选药物。 本试验对霉酚酸产生菌原有的发酵配方中的碳源、氮源、pH、磷酸盐等培养条件进行了详 细兹实验优纯，并应用正交实验方法，得到了霉酚酸的最佳发酵条傅。 1材料与方法 1．1麓种 霉酚酸的产生蘸F01．663分离囊我国云齑省黪±壤样瑟中。 1．2培养基成分 1．2．1斜面培养基；马铃薯葡萄糖琼脂(m气)，28℃培养，生长周期5--一7d。 7．0，自 l。2．2耪子培养基：乳耱lOg，饕萄糖l魄，蛋蠢胨跨，氯化镳勰，碳酸钙勰，pH 来水加至1000m1．121℃灭菌25分钟。斜面挖块接种于种子培养基中，250mL的三角瓶装量 40 h。 mL，置于28℃培养，220r／rnin摇床振荡培养28—48 1．2．3发酵摇瓶硪发培养基：乳糖159，葡萄糖159，蛋自胨lzg，牛肉膏8参氯化钠勰，碳 mL魄发 mL三焦瓶中装入30 酸钙忿，p珏7．0，囊来水加至1000ml，12l℃灭蘸25分锌。250 r／rain 酵培养基，并将培养好的种子液按3％的比例接种捌发酵培养基中，置于28—30C摇床，220 振荡培养5d。 记录沉淀体积，计算出相对于管中发酵液总体积的酉分数。 210 1．3制备分析 加入等体积乙酸乙酯混合，浸泡3h，取上清液加入抽干，加入乙醇溶解后加入EP管，洗 脱条件：MeOH：H20(3：4 2结果与讨论 2．1发酵培养基碳源种类及浓度的考察 2．1．1碳源主要用于供给生命活动所需的能量、构成菌体细胞及代谢产物，是微生物次级代谢产 物的主要原料之一。因此我们对发酵培养基中的碳源进行初步考察。实验中共选择了乳糖、麦 芽糖、蔗糖、葡萄糖四种碳源，以考察对霉酚酸发酵的影响，其他条件同摇瓶出发培养基。碳 源的浓度均为3％。结果见表l。 表1碳源对霉酚酸发酵的影响 碳源 MPA相对产量 乳糖 100 麦芽糖 75 蔗糖 79 葡萄糖 53 研究结果显示，在这四种培养基中，菌体生物合成霉酚酸的水平不剧，以乳糖为最佳，为 原摇瓶出发培养基碳源，其优劣顺序为：乳糖蔗糖麦芽糖葡萄糖。