纳米二氧化硅致HaCaT表皮细胞毒性作用的蛋白质组学研究.pdfVIP

中国环境诱变荆学会第14届学术交流会议论文集 长度就可以得出单个细胞DNA损伤程度；基因组DNA是电离辐射作用于细胞的最基本的靶分子，电离辐射 的生物学效应是通过其对细胞DNA损伤表现的，无论是电离辐射的直接作用还是间接作用都能引起基因组 DNA的链断裂【6】：造成组织细胞的损伤，同时修复发生：睾丸作为辐射敏感器官，同样具有较强的修复能 力，一般可部分或完全修复【7】。 LJP是从海带中提取的活性成分之一，它在动物体中的抗脂质过氧化作用及对机体自由基的清除能力 已被证樊¨】；作为本实验的干预物，在大鼠辐射前期以及辐射期间均予以灌胃干预。研究结果表明，虽然 随着停止辐射时问延长，uP组和模型组大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤程度减轻，与对照组相比拖尾细胞百 分率，还是DNAJ正移长度均存在极显著性差异；但LJP组和模型组组内不同处理条件同样存在极显著性差 异；LIP组与模型组各停止辐射对应组之问也存在极显著性差异；证实本实验慢性电离局部辐射对大鼠睾丸 生殖细胞有显著损伤，同时大鼠睾丸生殖细胞自身具有修复能力，LIP对慢性辐射所致的睾丸生殖细胞DNA 损伤具有明显保护和促进修复的作用；其机理可能与LJP抑制睾丸生殖细胞DNA氧化损伤的途径有关，提 示LJP对机体的酶促系统活力具有一定的诱导作用，可通过提高动物抗氧化酶活力的间接作用来清除过多 自由基，减轻氧化损伤的程度，从而减缓了慢性辐射对睾丸生殖细胞的DNA损伤。 参考文献：略 纳米二氧化硅致HaCaT表皮细胞毒性作用的 蛋白质组学研究 刘建军何浩伟张兵龚春梅蒋英芝庄志雄 深圳市疾病预防控制中心 【摘要】目的比较3种不同粒径纳米二氧化硅(rim．Si02)对人皮肤表皮细胞HaCaT的体外细胞毒性，并研 究nm．Si02对HaCaT细胞暴露24h后蛋白质表达的变化，筛选其致HaCaT细胞损伤的差异蛋白，以进一 CCK8法观察细胞的增殖抑制作用，确定剂量．效应关系，计算半数抑制浓度(ICso)：设置空白对照组，以 l，3 检测细胞周期和细胞凋亡，并制备蛋白样品进行荧光差异凝胶电泳(DIGE)，经扫描成像后进行图谱软件 分析，得到蛋白质差异表达数据，选取匹配良好的显著差异点进行MALDI—TOF．TOF—MS／MS鉴定，选取 差异蛋白Prx6进行western blot验证。结果不同粒径nm．Si02处理HaCaT后细胞贴壁能力减弱，存活率 下降，均呈剂量．效应关系，且不同粒径处理组对细胞的生长抑制率有差异，半数抑制浓度(IC卯)与埘胁．Si02 粒径成正比。相比对照组，3种粒径nlrl．Si02不同剂量处理组均引起HaCaT细胞Gl期阻滞，S期比例发生 不同程度的减少；此外，不同粒径的nm．Si02均能不同程度诱导HaCaT细胞凋亡，呈剂量．效应关系，且颗 粒粒径愈小，所诱导的凋亡率愈大。通过软件分析和数据库检索，得到155个差异表达的蛋白质点，其中 77个蛋白质点表达上调，78个下调，表达量上下调比例超过300,6。质谱鉴定出差异蛋白点41个，分属于 如下六大类：氧化应激相关蛋白、细胞骨架及相关蛋白、信号转导相关蛋白、分子伴侣、物质及能量代谢 相关蛋白、凋亡及肿瘤相关蛋白。另外，westernblot较好地验证了差异蛋白Prx6表达量的变化，证明反映 了2DE分析的准确性。结论不同粒径不同剂量nnl．Si02均使HaCaT细胞的一般生物学性状发生改变，包 括相对增殖率、细胞周期和细胞凋亡，且纳米颗粒的粒径与相对增殖率以及细胞凋亡率之间存在明显相关 性。另外，实验所得差异蛋白质的功能及其表达量的变化对于阐明不同粒径nm—Si02抑制细胞生长、诱导 细胞凋亡、降低细胞抗氧化损伤能力等生物学效应的分子机制具有重要作用，并在蛋白质水平上为解释这 24l 中国环境诱变剂学会第14届学术交流会议论文集 些效应与纳米颗粒尺寸之间的关系提供了线索。 关键词：纳米二氧化硅；HaCaT细胞；细胞凋亡；蛋白质组学； 引言 随着纳米技术的迅速发展及广泛应用，纳米材料的安全性问题正引起科学界及政府部门的巨大关注。 纳米二氧化硅(rim．Si02)作为纳米材料中的重要一员，是目前世界上大规模工业化生产产量最高的一种纳 米颗粒