耐甲硝唑幽门螺杆菌cagA基因检测与rdzA基因突变研究.pdfVIP

参评青年优秀论文 329 耐甲硝唑幽门螺杆菌cngA基因检测与rd以基因突变研究 谢国艳1’2， 高志生2， 胡嘉波1， 周建华2， 蔡志昌2， 黄 敏2 1．江苏大学基础医学与医学技术学院， 212001；1．上海交通大学医学院附属新华医院(崇 明)， 202150 摘要：目的研究c口gA基因、刑zA基因变异与幽门螺杆菌甲硝唑耐药的关系。方法收集临床分离幽门螺杆菌180 进行测序。结果蜜门螺杆菌对甲硝唑的耐药率为43．3％，其中甲硝唑高水平耐药菌55株(MIC≥32 mg／L)，占70．5％； 尉以基因突变率为56．7％；cagA阳性菌中高耐药菌所占的比例和刑以基因的突变率均明显高于cagA阴性菌。结论本 地区幽门螺杆菌感染以高毒力菌株为主，cagA基因阳性同时存在着府以基因变异的菌株能引起幽门螺杆菌对甲硝唑高水 平耐药。 关键词：幽门螺杆菌；cd以基因；硝以基因；基因突变；耐药性 associated A，f口一 及胃癌密切相关，而随着近年对Hp研究的深入，发现细胞毒素相关基因(cytotoxingene gA)是Hp重要的毒力因子，与Hp致病及相关疾病临床严重程度有关，因此在Hp致病机制中，其毒力基因 fngA基因起着重要作用。在根除Hp治疗中，硝基咪唑类药物甲硝唑有较强的抗Hp活性，是三联方案中 最广泛应用的抗菌素之一，但随着甲硝唑的广泛应用Hp对其耐药率呈逐年上升，报道耐药率由10％～ 90％不等，Hp对甲硝唑耐药已成为治疗失败的主要原因之一。目前认为Hp的刑zA基因与耐甲硝唑有 的c口gA及列zA基因。并对耐zA基因测序分析，对两者的相关性以及它们与耐药的关系进行探讨。 材料和方法 一、菌株来源 表性胃炎患者分离得到49株，慢性萎缩性胃炎患者得到26株、胃溃疡患者得到33株、十二指肠溃疡患者得 NCTC 到43株及胃癌患者得到29株。Hp11637标准菌株由中国疾病预防控制中心惠赠。 二、主要试剂 选择性幽门螺杆菌培养基(Ply)、酪蛋白绵羊血平板、微需氧袋及弯曲杆菌鉴定板条均购自法国生物梅 DNA聚合酶、DNA 里埃公司。Taq test条为BD公司产品。 三、Hp培养及鉴定 培养3～7 d，按照《厌氧菌和微需氧菌感染与实验诊断》中Hp鉴定方法。经细菌培养、染色镜检以及尿素 酶、过氧化氢酶、氧化酶同时阳性的菌株通过弯曲杆菌鉴定板条鉴定，置布氏肉汤一70℃保存备用。 四、药敏试验 平板，贴上药敏纸片并放入微需氧袋，37℃，培养3d后，观察其抑菌情况，并直接读取抑菌圈与试条的横向 相交处的MIC值，同时用每次试验用标准菌株NCTCll637(MIC值256 mg／L)作质控对照，以MIC值 ≥8mg／L判定为甲硝唑耐药。 五、PCR检测f口gA、一zA基因及产物分析 参评青年优秀论文 包括25 xPcR缓冲液5 mm。l，LMgcl，4ftI，t10 pI一，上、下游引物各O5“L，dNTPl”l|．Taq酶3PL．模 板2 Bl· osymms公一UJ}．进行。rdxA基因的PcR产物送上海博弧公司进行测序。取5ⅡLPcR产物采用2蹦琼脂 糖凝腔进行电泳升析。 Ⅲ自g# …自*“ H＆K＆nf_) 自§# 六、统}f学处理 n软件包统计。 资料分析采用f检验．应用sPss版本号10