1994-2008年北京协和医院MRSA进化和分子特征研究.pdfVIP

参评青年优秀论文 207 1994—2008年北京协和医院MRSA进化和分子特征研究 陈宏斌， 王 辉， 刘昱东， 姜秀虹， 刘亚丽， 陈民钧 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科，北京 100730 收集 摘要：目的研究北京协和医院14年间甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)的进化和分子特征。方法 PCR和测序进行spa和MLST分型，同时检测pvl基因。结果 t037。2000年之后，ST239一MRSA一Ⅲ一spa t037)出现并且取代了以 前的优势克隆(ST239一MRSA-Ⅲ一spa 因此，MRSA可能由MSSA进化而来。我们医院发现了CA—MRSA，应引起足够重视。 关键词：MRSA；SCCm卵；s加分型； MLsT；进化 甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)可以引起多种感染性疾病，包括皮肤软组织感染、菌血症、坏死 性肺炎、感染性心内膜炎和毒素休克综合征等。自19世纪80年代以来，在全世界MRSA成为一个严重的 们了解MRSA的流行病学和进化状况对于控制MRSA在医院和社区的传播非常重要。 是了解MRSA分子流行病学和进化特征的工具。PFGE是多种细菌分型的“金标准”，包括金黄色葡萄球 葡萄球菌中已发现8种SCCmPc元件。SCC优Pf 型方法。该方法分辨率高，近年来广泛用于MRSA分子进化和医院暴发流行研究。 型调查其分子进化过程。 材料和方法 一、材料 (一)菌株来源 208 参评青年优秀论文 离株通过多重PCR检测优PcA和^mB基因来确认MRSA。 TA 2020D型紫外凝胶成像仪(北京宾达英创科技有限公司)。 (三)试剂 公司)、rTaq 工程有限公司完成。 二、方法 (一)DNA提取 mL含有50u／mL 取血平皿上6～8个新鲜菌落，混悬于o．3 min，60 (pH=8．0)，35℃水浴30min，95℃煮沸10 000×g离心20s后取上清即为细菌总DNA溶液，测A 值检测DNA含量。 (二)spa分型 min，94℃变性 反应体系为50弘L，参照文献设计引物。PCR反应条件：80℃预变性5 45s，60℃退火45 s，72℃延伸90s，进行35次循环，最后72℃延伸10min。目前已公布226种重复序列和 3937个spa型别。PCR产物进行测序，在测序结果中查找已公布的重复序列，根据串联重复序列出现的次 数和排列方式确定型别。 (三)MLST分型反应体系为50肛L。PCR所用的引物参照文献。PCR反应条件：95℃预变性5min， 然后94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min循环35次，后72℃延伸5min。片段大小从402～516 (四)SCCmec分型 反应体系为25“L，参照文献设计引物。PCR反应条件：94℃预变性5min，然后 94℃变性45s，65℃退火45s，72℃延伸1．5min，循环10次，再次94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸 1．5min。循环25次，后72℃延伸10min。 (五)pvl基因检测 min，然后94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸1 bp。PCR扩增反应条件：94℃预变性5 min，循环30 min。 次，72℃延伸5 结 果 一、1994—2008年MRSAs抛、MLST和S