贵州野生匍匐剪股颖种质资源遗传多样性的ISSR研究.pdfVIP

贵州野生匍匐剪股颖种质资源遗传 多样性的ISSR研究 钟 理1，2王小利2干友民1+唐成斌2尚以顺2 (1、四川农业大学草业科学系雅安625014；2、贵州省草业研究所独山558200) 摘要 以国外匍匐剪股颢品种Kromi对照，采用ISSR分子标记技术，对贵州三大野生匍匐剪股颖居群进行遗 传多样性研究，结果表明：9个引物共扩增出多态性带66条，多态性条带比率(PP8)为81．48％，亚居群间遗传相似系数 范围在0．4074～0．9123之间，表明贵州野生匍匐剪股颗具有较丰富的遗传多样性：基于Nci’S相似系数对各亚居群进行 了聚类分析，地理位置相近的亚居群多可聚为一类，呈现出一定的地域性分布规律，相关分析表明，地理距离与遗 变异的49．2％。 关键词匍匐剪股颖遗传多样性ISSR swlonifera 匍匐剪股颖(Agrostis L．)隶属禾本科剪股颖属∽g埘咖L．)¨】，是一种重要的冷季型 草坪植物，在园林绿化草坪及高尔夫果岭草坪中广为应用。该属植物全世界已知有200多种，多分布于 寒温带，尤以北半球较多；在我国，有29种10交种，主要分布于四川东部、云南、贵州及华东、华 中等省区【2l。剪股颖属是分类较混乱的一个属，甚至“剪股颖”与“翦股颖”用法都不统一【3l。迄今国内 对匍匐剪股颖草坪建植、病虫害防治、形态学分类14-s]方面的研究较多旭涉及到分子水平上的较少， 01。 国外研究主要涉及AFLP、RAPD等多种分子标记技术在种质鉴定方面的应用【9’J 贵州位于中国西南部，属典型的亚热带季风湿润气候，蕴藏着丰富的野生植物资源。调查发现， 匍匐剪股颖、分布广、适应性强，有着良好的开发利用前景。针对国内仅一个匍匐剪股颖育成品种 —粤选一号，而引进品种存在越夏率低这一情况，试验加强对野生匍匐剪股颖材4料的收集，选取ISSK 标记技术对其遗传多样性进行研究，为进一步品种选育奠定基础。 ISSR标记，又称简单序列重复区间扩增多态性(inter-simplesequencerepeat，简称IssR)；标记，是 化、系统发育等[12-,71研究方面被广泛应用。 1材料与方法 1．1供试材料 试验共收集了贵州三个野生大居群的匍匐剪股颖材料，居群间地理位置相距远、生境差异明显。 匍匐剪股颖在各居群中呈集群分布(详见表1)，同一居群的亚居群间地理位置相互靠近，易于种质 交换，生境差异不明显。鉴于匍匐剪股颖以小亚居群形式存在的分布方式及无性繁殖能力强的特性， 采用混合采样法，即每亚居群采集15个单株的叶片，等量混合后，CTAB法【l8l提取叶片总DNA。一 方面尽可能多的检测到居群的遗传变异；另一方面，由于材料居群较小，避免因采集到同一植株的 克隆后代性系后代而引起的试验误差。以国外品种克罗米(Kromi)．进行ISSR研究。 1．2剪股颖ISSR反应体系的建立及优化 cerltcrof 贵州省科技厅项目：贵州省革业工程技术中心(合同编号“黔科台农字[200514002号”)[Supportedbythe of pratacoltureprojectGuizhou(No】 通讯作者：干友民(1954--)，男，副教授，硕士生导师，研究方向：草业科学。E-maihpopulationvc(堑163．com． ’：307 试验试用鸭茅【191，剪股颖属f20]反应体系，开始进行预备试验，对反应体系各影响因素(包括M92+， 表1供试材料来源 居群 样点 采集地点 海拔(m) 生境情况 各注 (pop]ations)(subpop]ations)origins Altitude Habitat Remark 优化反应体系为25止，内含：17．60L无离子水，1阻L(2mmol／L)dNPs，21．tLloxpCRbuffer，2山 增