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第三节 常用定量分析方法及其运用药学0201 王欢欢 .ppt
第三节 常用定量分析方法及其运用 药学0201 王欢欢 3021901012 生化药物、基因工程药物常用定量分析方法 理化分析法 化学分析法 电化学分析法 光谱分析法 色谱法 生化测定法 酶法 电泳法 生物检定法 化学分析法 重量法 根据样品中分离出的单质或化合物的重量测定所含成分的含量 根据被测组分分离方法分类： 提取法 胰酶中脂肪含量的测定 挥发法 炽灼残渣 干燥失重 沉淀法 沉淀反应 滴定分析法 根据样品中某些成分与标准溶液能定量地发生酸碱中和、氧化还原或络合反应等进行测定 电化学分析法 离子选择性电极 药物电极 酶电极 药物膜电极 酶催化反应 生物组织膜电极 生成产物不 微生物电极 同，电极种 免疫电极 类不同 免疫场效应管 其他：极谱氧电极法 微电流电位法 生物传感器技术 光谱分析法 比色法 ?蛋白质 双缩脲反应 ?硫酸软骨素 Elson-Morgan比色法 按干燥品计算，测定氨基己糖含量 原理：酸性条件下水解 氨基己糖 碱性条件下与乙酰丙酮反应 再与二甲氨基苯甲醛反应 氨基葡萄糖（红色） 以盐酸葡萄糖溶液为对照，525nm测定A 计算: 紫外分光光度法 ?蛋白质 280nm ?糜蛋白酶与底物N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作用后产物 237nm 荧光分光光度法 ?反应物或反应激发产生荧光直接测定 ?应用荧光试剂的荧光测定 ?应用另一酶的催化反应的荧光测定 酶法 酶活力测定法 酶分析法 以酶为分析对象 以酶为分析工具或试剂 活力单位 比活性 酶以外其它物质的含量 共同点： 以酶能专一而高效地催化某些反应为基础，通过对酶反应或生成物等浓度的测定而检测相应物质的含量 酶活力测定法 基本概念 ?酶活力 酶催化一定化学反应的能力 ?活性单位（国际单位，IU） 任何一种酶，在25℃ 以最适当的底物浓度、 最适当的缓冲离子强度以及最适当的pH等 条件下，每分钟能转化一微摩尔底物的酶量 ?比活性 每一毫克蛋白质所含酶的单位数 ?分子活力 每微摩尔酶对最适底物的活性单位 每个酶分子每分钟转化底物的分子量 测定方法 物理法 化学法 酶分析法 终点法 动力学法（取样测定法） 反应速率法（连续测定法） 取样测定法 中止酶反应 酶变性剂 5%三氯醋酸 3%高氯酸 酸 碱 醇 连续测定法 在反应过程中对反应系统进行连续检测 准确性和测定效率都较取样法更好 检测方法 ?紫外－可见分光光度法 氧化还原酶 ?脱氢辅酶NAD(P)H 340nm ?细胞色素氧化酶底物细胞色素C 550nm 摩尔吸收系数 2.18×104 氧化型 0.80×104 ?荧光分光光度法 ?底物本身在酶反应过程中有荧光变化 ?利用具有荧光底物 ?旋光度法 ?酶偶联测定法 ?其他 电化学测定法 离子选择性电极测定法 放射化学法 举例 胰蛋白酶效价测定 胰蛋白酶能专一地作用于赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的羧基组成的肽键，酰氨键及酯键 ?供试品溶液的配制 精密称取本品适量 0.001mol/L盐酸溶液溶解 制成50-60IU/ml胰蛋白酶溶液 ?底物溶液的配制 BAEE盐酸盐85.7mg 加水溶解使成100ml 精密量取10ml 磷酸缓冲液稀释成100ml 25.0± 0
本人在医药行业摸爬滚打10年，做过实验室QC，仪器公司售后技术支持工程师，擅长解答实验室仪器问题，现为一家制药企业仪器管理。
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