不同猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株在Marc-145细胞的生长特性研究.pdfVIP

· 164 · 疾病防治 中国畜牧兽医 2Olo年第 37卷第 3期 不同猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株在 Marc-145细胞 的生长特性研究 李春梅 ，邓雨修 ，王东东，苏润环 ，招丽婵 ，宋延华 (广东温氏食 品集 团有限公司研究 院，新兴 527400) 摘要 ：本试验对 PRRSV-CG、YN9、TP、TPA及 SHB株在 Marc—l45细胞上进行 了部分体外生长特性研究。病毒生长曲 线分析发现 TP-A毒株产生病变速度快且病毒滴度高 ，其次为 YN9、TP、CG和 SHB；病毒蚀斑形态学分析发现 TP-A 和 YN9 较其余毒株形成的蚀斑大且 比较均一，为大蚀斑 。综合可见不同的PRRSV分离株体外生长特性具有较大的差异，为病毒 的 分子生物学研究奠定 了基础。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ；Marc145细胞 ；生长特性 中图分类号 ：$852．65～9．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：l671—7236(2010)030164～03 猪繁殖与呼吸综合征 (porcinereproductiveand 分别在 Marc一145细胞上传至第 6代；TP—A变异株 respiratorysyndrome，PRRS)自1987年首 次发现 为 TP株在 Marc一145细胞系连续传至 120代所获 以来 ，几乎遍及世界各个养猪 国家，给养猪业带来了 得的毒株 。 巨大的损失 (Hopper等 ，1992)。以猪 的高热、高发 1．2 病毒生长曲线分析 按 Wang等 (2008)的方 病率和高死亡率为特征的高致病性猪繁殖与呼吸综 法进行 ，每株病毒分别在 12、24、36、48、6O、72、84、 合征 (HPPRRS)，是 目前危害 中国养猪业 的重要传 96和 108h取样，测其 TCID。。试验重复 1次，最 染病之一 (Tian等 ，2007)。不同的猪繁殖与呼吸综 终试验结果为 2次试验 的平均值，用 检验对数据 合征病毒 (PRRSV)分离株在 Marc145细胞上的增 进行统计学分析 ，比较病毒毒价的差异是否显著。 殖效率有一定的差异 (won—ll等，2008)。本研究对 1．3 病毒蚀斑形态学分析 按 Won一11等 (2008)的 方法进行，略作改进 。试验重复 1次，最终试验结果 广东温 氏研究 院猪病研究 中心分离鉴定 的 5株 PRRSV分离株分别进行体外生长曲线分析及蚀斑 为2次试验的平均值 ，用 t检验对数据进行统计学 形态学分析 ，研究其体外生长特性 ，为 PRRSV分子 分析，比较蚀斑大小 (直径)的差异是否显著。 生物学研究及弱毒疫苗毒株的筛选提供相关依据。 2 结果 1 材料与方法 2．1 病毒生长曲线分析 通过连续 2次的毒价测 1．1 细胞和病毒 Marc145细胞 由广东温 氏研究 定发现 ，同一毒株相对应的时间点其毒价有所波动， 但经 t检验显示 2次试验之 间差异不显著 (P 院猪病研 究 中心保存 ；CG变异株 (GenBank登录 号：EU864231)、TP 变 异 株 (GenBank登 录 号 ： 0．05)。如表 1和 图 l显示 ，TP—A在 Marc一145细 EU864233)、SHB 经 典 株 (GenBank 登 录 号 ： 胞 现增殖明显、毒价高等特点，毒价约在 48h能 EU864232)(宋延华等，2008)、YN9变异株均 由广 达到峰值 ，且最高 TCID。约为 10 。；其次为 YN9， 东温氏研究院猪病研究中心分离鉴定 ，各试验毒株 最高滴度达到 10 。；TP和 CG在接种后 72h出现 表 1