SO2 胁迫对拟南芥抗氧化酶活性影响.docVIP

SO2胁迫对拟南芥抗氧化酶活性的影响 王 磊，仪慧兰* 山西大学生命科学与技术学院，山西 太原 030006 SO2是一种常见的全球性大气污染物，对人类健康和生态系统有严重的危害。多数植物在SO2胁迫时不能正常生长发育，因此研究SO2对植物的影响、分析植物逆境生理过程，对损伤和抗逆机理研究具有重要意义。文以3周龄的拟南芥（Arabidopsis thalianal L.）植株为实验材料，对幼苗进行SO22.5、10、30 mg·m-3）连续熏气，定时（8、56、104、152 h）检测地上部分抗氧化酶活性和可溶性蛋白质含量的变化。结果表明，SO2熏气前期超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性诱导性增高，其中SOD活性增加最快，8 h后即显著高于对照，并具有浓度效应，POD活性在SO2暴露8 h后略有增高，56 h、104 h时明显增加；熏气152 h后，SOD和POD活性显著降低。处理组和对照组的过氧化氢酶（CAT）活性和可溶性蛋白质含量在熏气前期略有增高，152 h后有所降低。研究结果表明，环境中较高浓度的SO2对植物细胞具有氧化胁迫作用，并可能产生氧化损伤效应。 SO2；拟南芥；抗氧化酶中图分类号：X 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2007）0-1612-03大气SO2污染是一个全球性的问题，主要来源于含硫矿物的燃烧和冶炼。我国作为以煤炭为主要能源的国家之一，SO2污染非常严重。环境中高浓度的SO2能干扰植物的新陈代谢，加快呼吸作用[1]，减少可溶性糖的含量[2]，降低光合效率，破坏叶绿素[3]，诱发染色体畸变[4]。而且，SO2污染与人类的某些疾病相关[5]。因此，关于SO2毒性的研究十分重要。 生理条件下植物细胞中活性氧的产生和消除处于动态平衡中。逆境中植物受到的伤害，通常是由于胁迫产生了大量活性氧造成的[6]。研究表明，SO2对植物的伤害与细胞内活性氧自由基的爆发有关[7-8]，但目前为止，SO2的损伤机理还不清楚。拟南芥是国际上公认的模式植物，对它的研究成果可以推广到其它植物，尤其是十字花科的经济作物。本实验通过分析SO2对拟南芥植株生理生化指标的影响，研究SO2的氧化损伤效应，探讨SO2的毒性作用机制。 以拟南芥（Arabidopsis thaliana L.）哥伦比亚生态型（Col-0）为实验材料。四月上旬将拟南芥种子用牙签点播到蛭石：泥炭藓：珍珠岩（1：1：1）的营养介质上，于4 ℃暗处春化2 d，放入人工气候箱22 ℃培养相对湿度60%80%，光照周期为光照/黑暗16 h/8 h。取3周龄幼苗用于实验。 将幼苗放入熏气室内适应1 d后，分别用不同浓度的SO2（2.5, 10, 30 mg·m-3）在室温、自然光照下熏气。采用静态熏气，由K2S2O5+2HCl→ 2KCl+H2O+2SO2↑，定量产生SO2气体，并采用甲醛吸收-副玫瑰苯胺分光光度法监测SO2浓度，控制上述反应保持熏气室内SO2浓度稳定。分别于熏气第1、3、5、7 d的下午15:00取植株地上部分检测所需指标，重复3次。 取植株地上部分，加入提取液（50 mmol·L-1磷酸缓冲液，pH 7.8，含2 mmol·L-1 Na2EDTA和1％PVP），冰浴中匀浆，10000 r·min-1离心20 min，上清液即为酶提取液. 超氧化物歧化酶（SOD）测定用NBT光化还原法[9]167-169；过氧化物酶（POD）测定用愈创木酚氧化法[9]164-167；过氧化氢酶（CAT）测定用紫外吸收法[10]。可溶性蛋白质含量的测定用考马斯亮蓝染色法[9]184-185。 采用SPSS13.0统计分析软件对数据进行单因素方差分析，并用Dunnett法比较处理组与对照组间的差异显著性。图中*”表示P0.05**”表示P0.01。 SO2熏气后，SOD和POD活性诱导性增高，前104 h内呈浓度依赖性升高（图1）。SOD活性最先被诱导，熏气8 h后显著高于对照，随后持续较高水平；POD活性在SO2暴露8 h后略有增高，56 h、104 h时明显增加。CAT活性变化不明显，只在104 h时略高于对照。熏气152 h后，三种抗氧化酶活性均降低，且SOD和POD活性显著降低。 图1 SO2胁迫对拟南芥地上部分抗氧化酶活性的影响（以鲜质量计） Fig. 1 Effect of SO2 on antioxidant enzymes activities in aerial part of A. thaliana (FW) 植物受到不良环境胁迫时，SOD、POD和CAT能被诱导合成，参与对活性氧的淬灭。高浓度SO2暴露能引起拟南芥叶片气孔关闭率提高、气孔开度变小（结果待发），限制SO2的过量进