江苏宜兴地区丙型肝炎病毒基因型及F蛋白抗体分布的研究论文.pdfVIP

第九届全军藏行瘸学·第八屠全军防生钳危害医学专业学术,J哺ttt：t：集 江苏宜兴地区丙型肝炎病毒基嚣型及F蛋白抗体分布的研究 张云’许可2蒋拳梅2邓小曩。哈荣彬2刁振字‘丁伟良3 ’南京军区疾囊预防控舒中心流行囊t生物学研究所南京210002 2南京医科大学澶行囊与卫生统计掌系3宣兴市第一人民医院 Cvirus,HCV)为单股正链RNA病毒，其核苷酸序列具有高度的 丙型肝炎病毒(hepeaas 变异性，是导致丙型肝炎慢性化的重要原因。HCV的基因型分布具有明显的地区差别，且不 同基因型对干扰素治疗的反应率差异显著，2型和3型的干扰素治疗反应率达70％-80％，而 lb型的反应率仅为400／0-5∞0． 近年来发现，HCVRNA的核心区还低水平表达了另外一种新型C蛋白．以往的一一些研究 认为这种的新型C蛋白是被截短了的核心蛋白。而最近的研究表明，这种蛋白是由重叠在核 心编码区的一段序列编码。与HCV传统单一阅读框架翻译的病毒蛋白不同，新型C蛋白是山 HCV核心蛋白编码序列在翻译时发生核糖体读码框移位产生的，被命名为新型C蛋白或 ribosomalframeshifi ARFP(alternative protein)或F(frameshifiing)蛋白． 实验中半衰期约IOmin，应用蛋白酶体抑制剂MGi32可增加其稳定性；免疫荧光染色及弧细 胞分布实验发现F蛋白位于胞浆中，主要与内质网相连．在HCV感染者血清中检测到针对F蛋 白的特异性抗体，说明在HCV感染的自然病程巾有F蛋白的产牛。且F蛋白特-片的体液和细 胞免疫反应在各基因型问有交叉。 了解江苏宜兴地区丙型肝炎病毒的基凶分型对本地区．丙型肝炎的预防和治疗有重要意 义，调查抗F抗体的分布情况为进一步探讨F蛋白的功能及病毒侵入宿主中的作川打。F了 基础。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1血清来源：158例HCV抗体阳性患者(上海科华牛物技术有限公司酶联免疫法HCV 抗体检测试剂盒检测)。平均年龄为49．44岁，其中男性104人，女性54入；结合流行病学调 查和临床病史，根据rII华医学会传染病与寄牛虫分会和肝病分会，2000年病毒性肝炎诊治方 案中诊断标准慢性丙型肝炎患者119人，急性丙型肝炎患者26人，丙型肝炎肝硬化患者21 人，并结合肝脏超声、CT确诊。阴性对照组为来自宜兴市人民医院的10份健康者血清(HAV、 HBV和HCV感染指标均阴性)。 1．1．2 端的序列，克隆至原核表达载体pGEX．4T-2，转化E．coliTGl后，IPTG(!．OmmoL／L)诱导表达，超 声裂茼。Glutathione4B亲和层析柱纯化回收HCV-F／GST蛋白。SDS．PAGE鉴定纯度， Sepharose 紫外分光光度法测浓度(1州“L)，详见参考文献。 1．2方法 1．2．1HCV RNA阳性检测：①提取HCV RNA及逆转录抗HCV刚性血清2501al，采川 异硫氰酸胍一步法提取RNA，TRI RNA溶液，采用六聚体 reagentBD为MRC产品。取5pI 5NCR 测HCVRNA，采用 的保守区通用弓l物： 外正义弓I物 第九j击拿V流行病学-笫八脑全_!防生物危戎医学专、lk学术会议论文蜒 3’(99．118nt)；内反义引物5 3(257．276ntl；内正义引物5AGTGTCRTRCAGCCTCCAGG ，ACCCAACRCTACTMGGCTAG 步骤为95。C5min，95 bp。 轮PCR，采用25p．I体系，步骤l司前。扩增片段为(99—269nt)171 1．2．2HCV丝囚分犁：本研究采用了Simmonds分犁方法。囚国内报道我国丙犁H：t：炎病毒以