非感染性亚病毒颗粒对乙肝病毒感染增强效应.pdfVIP

原 文：Enhancement of Hepatitis B Virus Infection by Noninfectious Subviral Particles 作 者：MICHAEL BRUNS, STEFAN MISKA, SYLVIE CHASSOT, AND HANS WILL 作者单位：Heinrich-Pette-Institut fu¨r Experimentelle Virologie und Immunologie ander Universita¨t Hamburg, D-20251 Hamburg, Germany 发表刊物：JOURNAL OF VIROLOGY,Feb. 1998, p. 1462–1468 Vol. 72, No. 2 以下为中文翻译稿 ： 非感染性亚病毒颗粒对乙型肝炎病毒感染的增强效应 摘要：乙型肝炎病毒感染过程中，相对病毒粒子数量大量过量的亚病毒颗粒的 生物学功能尚不清楚。以鸭乙型肝炎为模型，研究发现亚病毒颗粒能显著增强细 胞内的病毒复制和基因表达。该效应对感染滴度、病毒粒子与亚病毒颗粒的比例 以及亚病毒颗粒加入的时间具有依赖性。更重要的是，在细胞编码的病毒受体蛋 白的结合区域存在时，亚病毒颗粒的pre-S蛋白能触发该增强效应。这些数据表 明这种增强作用由pre-S蛋白的反式激活功能或亚病毒颗粒与细胞受体的结合所 活化的信号途径所引发。该发现还具有临床意义，它们显示含嗜肝病毒的血清的 感染性不仅仅依赖于感染性病毒粒子的数量，还与不含核酸的粒子的数目息息相 关。这种由非感染性颗粒引起的感染增强效应在其他一些病毒感染中也是可能 的。 嗜肝病毒能够在人类、啮齿目动物和鸟类中引发急性和慢性肝病。其感染通 常导致上千倍多于病毒粒子的亚病毒颗粒(subviral particles ，SVPs)的合成。 SVPs包含宿主细胞来源的脂质和病毒衣壳蛋白，但不具有病毒核衣壳蛋白和核酸 (13)。乙型肝炎病毒(hepatitis B viruses,HBV)的衣壳蛋白，即小S和大S(或称 pre-S)蛋白，在病毒生活周期中具有一系列不同的功能:感染早期，它们与细胞 受体结合介导病毒粒子的细胞内摄入；感染晚期，他们对于病毒粒子的组装和分 泌十分重要(4，5，34)。由于pre-S蛋白不恰当表达导致的病毒粒子组装和分泌 的阻断会引起细胞内病毒DNA转录模板拷贝数的上调(36)。另外，当pre-S蛋白以 突变体形式进行表达或者在细胞内堆积时，与病毒致病有一定关系(4, 9, 10, 35, 47, 48)。最近有报道称，人乙型肝炎病毒的非变异全长pre-S蛋白具有转录激活 功能。这可能提示该功能在正常病毒生活周期甚至可能在肝癌发生中起作用 (18)。 鸭乙型肝炎病毒（duck hepatitis B virus， DHBV）pre-S衣壳蛋白P36上可 能的受体结合位点和抗原决定簇已了解的很清楚(7, 20, 31, 32, 37, 49, 55)。 但仍不清楚为什么HBVs会产生大批过量的病毒衣壳蛋白并绝大多数最终都形成 SVPs。据推测这些SVPs作为体内免疫系统的“decoy”，干扰其对感染性病毒粒 子的清除而保证有效感染，因为SVPs与病毒粒子具相同的衣壳蛋白，可与相同的 细胞受体结合。令人意外的是这似乎仅发生在使用大批量过量的SVPs的情况下， 如高滴度感染(28)。因此，我们尝试调查在低滴度感染条件下，一种更能反映自 然感染的条件，SVPs是否对感染具有不同的影响。令人惊讶的是，我们发现在此 条件下SVPs能显著增强感染效应且该效应由pre-S蛋白上一个特殊结构域所介 导。 1 材料与方法 1.1 细胞与病毒 鸭胚原代细胞培养按Köck and Schlicht(30)所述方法进行.简述之:受精鸭蛋 在37℃,湿度50%自动孵化器中孵育21天.然后自鸭胚中取出肝组织,加入0.5%胶 原蛋白酶在37℃消化1小时后分离得到肝细胞。细胞用Williamsmedium E（WME， GI