氟对不同发育时期中华大蟾蜍蝌蚪急性毒性及安全浓度评价-修改20120620.docVIP

氟对中华大蟾蜍蝌蚪的急性毒性试验及安全浓度评价 杨电明，王宏元, 吴民耀* 陕西师范大学生命科学学院，西安 710062 摘要：氟与人体生命活动Fluorine is an important element for human life activities. Excessive fluoride caused variety of endemic fluorosis. Fluoride ion must be considered as a serious pollutant since its concentration in many aquatic ecosystems is significantly increasing as a consequence of mans activity. Amphibian is an important evaluation life in aquatic environment that can responsive the changes of water quality. Safe concentrations (SCs) and LC50 of fluoride ion for different developmental stages of Bufo gargarizans are estimated from short-term toxicity bioassays using different concentrations of sodium fluoride in the water. We also studied the influence of fluorine on the tadpole of liver using histological methods. The present study suggests that larval sensitivity is different at larval age and have a significant time dependent. Fluoride can damage the liver cells of the tadpole. Keywords: fruoride; Bufo gargarizans; tadpole; toxicity; LC50 氟是动物及人体所必需的微量元素之一，以氟离子的形式广泛分布于自然界。海水中氟1.2~1.5mg/L之间[1]，淡水中氟为0.01~ 0.3 。氟化物与人体生命活动密切相牙齿骨骼组织代谢少量氟可以促进牙齿珐琅质对细菌酸性腐蚀的抵抗力，防止龋齿EC # 231-667-8）为分析纯，纯度在99%以上，购自Sigma化学试剂公司。试验前用双蒸水配成 1000mg/L F- 的母液，试验开始时稀释成试验所需 F- 浓度的暴露溶液。 1.3 试验条件 23、26、30期蝌蚪使用实验室室温（15±2）℃曝气3d 的自来水，36期蝌蚪分两组，分别使用曝气自来水和去离子水，试验所用容器为50cm*20cm*10cm（长宽高）的玻璃缸，每容器盛试验液 2L，并在不同实验随机放入相应时期的蝌蚪，试验期间监测水质，水温（15±2）℃、 DO≥7.0 mg/L、硬度（30±5 ）mg/L（CaCO3）、pH 值7.0 左右，试验期间不投饵，为保证试验浓度的准确性，每 24h 更换全部试验液。 1.4 实验方法 首先根据氟对其它蝌蚪毒性试验的相关研究及预试验结果设置 10个浓度组，F- 浓度分别为350、400、450、500、550、600、650、700、750、800mg/L，另设自来水对照组，对照组不加入F- 。暴露后前12小时每隔 2h 观察1次蝌蚪行为、中毒症状及其死亡情况，暴露12h后，每隔6h观察1次，暴露72h后，每隔3h观察1次。每24小时完全换水一次，实验过程中不给蝌蚪投食。当蝌蚪沉于水底，用玻璃棒多次刺激蝌蚪的尾部，蝌蚪没有任何反应时就认为其死亡。及时将死亡的蝌蚪捞出，避免蝌蚪皮肤分泌有毒物质对其他蝌蚪的影响，也避免同类相食对结果的影响。记录24、48、72、96h 死亡蝌蚪数。 将36期对照组和800mg/L组蝌蚪进行解剖，取出肝脏进行石蜡包埋，对包埋组织块以6μm 厚度连续切片，进行HE染色，然后比较对照组和实验组肝脏细胞的差异。在肝脏组织切片不同区域中选取多个相同面积，分别计数对照组和实验组的肝细胞数目，比较其细胞数目的差异。 1.5 结果计算与数据统计 氟对中华大蟾蜍蝌蚪不同发育时期的安全浓度及95％置信区间采用多因素概率分析法(MPA)进行分析[12-13]。本实验中利用蝌蚪在氟中暴露时间24h、48