乙醛脱氢酶提取工艺与活性与研究1.pdfVIP

洼压料技大学 论文题目： 乙醛脱氢酶提取工艺与活性研究 申请学位学科：工学硕士 所学学科专业：生物化工 培养单位：生命科学与工程学院 硕士生：李鑫 导师：毛跟年教授 201 1年5月 RESEARCHoNEXTRACTIoN ALDEHYDE ANDEFFECToF ADissertationSubmittedto Shaanxi ofScienceand University Technology in The forthe of PartialFulfillmentof RequirementDegree Masterof Engineering Dissertation Supervisor：Professor．M．．．．．．a．．．．o．．．．G．．．．．．e．．n．．．．n．．．．i．a．．．．n．． May．2011 乙醛脱氢酶提取工艺与活性研究 摘要 乙醛脱氢酶(aldehyde 各种动物、植物和微生物体内。在人类和其他许多动物体内，线粒体乙醛脱 氢酶能把对生物体有害的醇类转化，所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到 高度关注；同时，乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面也多有 研究应用。 本文对啤酒废弃酵母中乙醛脱氢酶进行了提取，采用低浓度偏碱性磷酸 盐缓冲液抽提。破碎酵母细胞释放乙醛脱氢酶采用了高压匀浆法，纯化过程 采用了硫酸铵分级沉淀、DEAE—Sephadex G-150凝胶排阻色谱技术，逐步探索出分离、提取、纯化的合适方法和条件。 破碎废弃酵母提取乙醛脱氢酶结果为14．85U／109酵母泥、匀浆两次结果为 6．4％。同时考察了酶的性质，结果表明，啤酒酵母线粒体乙醛脱氢酶主要以 该酶最适反应温度为30℃；在pH 2+、Ca2+也表现出一定的激活作用，其他金属离子如Nr、 大的促进作用，Mg Cs2+、Zn2+对酶活性表现出不同程度的抑制作用。该酶具有广泛的底物专 一性，催化包括乙醇在内的某些一级或二级醇、醛和酮的脱氢反应，其中乙 醛为乙醛脱氢酶最佳作用底物。 对乙醛脱氢酶活性研究主要集中在其体内催化乙醛代谢性能上，体外试 验结果表明，乙醛脱氢酶在人工胃液、肠液中以乙醛为底物的反应，导致乙 醛浓度的降低，在人工胃液中乙醛含量降低了33．4％，在人工肠液中乙醛含 量降低了60％。体内试验选用的是昆明种小鼠，以小鼠翻正反射消失、恢复 时间和小鼠血液中乙醇含量变化为指标进行考察。试验表明乙醛脱氢酶解酒 剂量组与对照组，在延长小鼠醉酒时间和缩短小鼠酒后睡眠时间方面有显著 差异，表现了解酒效果。同时，小鼠体内乙醇含量检测表明，阳性对照组和 乙醛脱氢酶各剂量组，在各个时间点都比对照组小鼠血液中乙醇含量低。 关键词：乙醛脱氢酶，分离纯化，活性作用 RESEARCHoNEXTRACTIoN ANDACTIVITYEFFECToFALDEHYDE DEHYDRoGENASE ABSTRACT Aldehydedehydrogenase(aldehyde inawid