二甲苯兰FF-溴化十六烷基三甲基铵-核酸共振光散射光谱研究及分析应用.pdfVIP

第 27卷，第 2期 光 谱 实 验 室 Vo1．27，NO．2 2010年 3月 ChineseJournalofSpectroscopyLaboratory M arch ，2 0 10 二甲苯兰FF一溴化十六烷基三甲基铵一核酸 共振光散射光谱研究及分析应用 欧阳振中① 白珊 杜正华 (湖南长沙环境保护职业技术学院 长沙市雨花区井圭路 10号 410004) 口(海南师大附中 海口市美兰区灵山镇新大洲大道机场北路 571126) 摘 要 在 pH 9．90的Tris—HCI缓冲溶液中，阴离子染料二甲苯兰FF(XCFF)对阳离子表面活性剂 溴化十六烷基三甲基铵 (CTMAB)与核酸 (fsDNA、ctDNA、yRNA)的共振光散射光谱有协同增强作用。考 察了影响因素．在优化条件下研究了共振光散射强度与核酸浓度之间的关系，对于fsDNA、ctDNA、yRNA 的线性范围分别为 0．o5—3．0mg／L、0．o5—6．0mg／L、0。5—2．0mg／L，检出限分别为 24。1、18．4、57．0 ~／g／L。据此建立了一种测定核酸的新方法。 关键词 溴化十六烷基三 甲基铵；二 甲苯兰FF；核酸；共振光散射 中图分类号：O657．32 文献标识码：A 文章编号：1oo4—8138(2o1o)o2—0645—03 1 引言 共振光散射 (RLS)光谱法已在蛋白质和核酸测定中得到应用[h引。用共振光散射法测定核酸的 主要试剂阳离子型小分子n]。本研究发现，阴离子染料XCFF可敏化阳离子表面活性剂溴化十六烷 基三 甲基铵(CTMAB)与核酸的反应，并导致 RLS强度增强，且 RIs强度的增加值与核酸的浓度 在一定范围内呈良好的线性关系，以此建立了一种测定核酸的新方法 。 2 实验部分 2．1 仪器和试剂 LS50B荧光分光光度计 (美国PE公司)；pHS一3C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂)。 鱼精DNA(fsDNA)、小牛胸腺DNA(ctDNA)、酵母核糖核酸 (yRNA)为生化试剂 (上海伯奥生 物科技有限公司)：fsDNA，ctDNA，yRNA直接溶于适量的水中配成浓度为 100mg／I的储备液 ，并 在 O一4C下保存 ，fsDNA，ctDNA操作液浓度为20mg／I，yRNA操作液浓度为 100mg／I；XCFF溶 液：lmmol／I；CTMAB溶液 ：lmmol／I；pH9．90的Tris—HC1缓冲溶液 ；其他试剂均为分析纯。实验 用水为二次蒸馏水 。 2．2 实验方法 于 20mI的比色管中，依次加入 2．5mlTris—HC1缓冲溶液、1．0mI的CTMAB、一定体积的核 酸溶液和0．5mI的XCFF溶液，用二次蒸馏水定容至刻度，小心混匀，放置 20min。用 1×lcm的比 色皿，以 一 方式同步扫描，激发和发射狭缝均为 8nm，测得 RLS光谱 。在 435．82nm处测定核 ①联系人。手机：(oE—mail：oyzz2000@163．~om 作者简介 ：欧阳振 中(1976一)．男，长沙市人，助教．主要从事环保工作 。 收稿 日期：2010—01—19；接受 日期：2010—02—03 光谱实验室 第 27卷 酸加入前后溶液的RIS强度差AI=I--I。(厶、——分别为核酸加入前、后体系的RLS强度)。 3 结果与讨论 3．1 光谱特征 研 究表 明，单 独 的 fsDNA 溶 液、XCFF和 90 CTMAB溶液在 测定 条件下，350--600nm 范 围 RIS信号较弱。向XCFF体系中加入 fsDNA或 60 CTMAB时，体系的RIs变化微弱 ；向CTMAB体 系中加入 fsDNA时可引起 RIS信号的增强 ，说明 30 CTMAB可 在 fsDNA 表面 产生一 定 的 聚集 作 样品的测定结果，回收率在 97．9 一99．89，5之间，测定结果令人满意。