中西医结合抗绿脓杆菌生物膜作用的研究.pdfVIP

№ ．1 陕西科技大学学报 Feb．2010 · 66 · JOURNALOFSHAANXIUNIVERSITY OFSCIENCE TECHNOIOGY Vo1．28 文章编号：1000—5811(2010)Ol一0066—04 中西医结合抗绿脓杆菌生物膜作用的研究 ， 袁秀丽 ，吕嘉枥 宋娟娜 ，程慧娟 (1．陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西 西安 710021；2．安徽 中医学院微生物教研室，安徽 合肥 230031) 摘 要 ：研究了金银花水煎液体外抗铜绿假单胞菌生物膜的作用及与庆大霉素的协同作用：通 过试管稀释法测定 了金银花水煎液和庆大霉素对铜绿假单胞菌的最小抑茵浓度 (minimalin～ hibitoryconcentration，MIC)，用MTT法建立了体外铜绿假单胞茵生物膜并检定 了金银花 水煎液和庆大霉素不同MIC浓度的抗铜绿假单胞菌生物膜的作用．结果表 明：金银花水煎液 对绿脓杆菌的MIC为 125mg／mL，SMIC也为 125mg／mI；庆大霉素对绿脓杆菌的MIC为 1．56“g／mI，SMIC为 25~／g／mL，与金银花的协 同作用对绿脓杆菌的SMIC为 1．56~／g／mL． 由实验结果可知金银花水煎液在体外能抑制铜绿假单胞杆菌(Pseudomonasaeruginosa，P． A)对固体表面的黏附能力及生物膜 (biofilm，BF)形成能力，并能破坏 P．A 已形成的BF ， 增强庆大霉素对BF内铜绿假单胞菌的清除作用． 关键词 ：生物膜 ；铜绿假单胞菌(又名绿脓杆菌)；金银花；庆大霉素 中图分类号：R917． 文献标识码：A 0 引言 金银花是我国十大名贵药材之一 ，具有清热解毒之功效。金银花含有多种药理活性成分 ，其中绿原 酸 、黄酮类化合物是金银花 中的主要药效成分，具有抗氧化、抗癌、抗病毒等作用 ，一般金银花 中绿原酸含 量不低于 1．5 ，通过测定绿原酸的含量可评价受试金银花的质量． A．a(Pseudomonasaeruginosa)是院内获得性肺炎及慢性呼吸道感染的重要病原菌之一 ，BF(bio— film)形成也是导致 P．a慢性呼吸道感染的重要原因之一．国内外对 P．a的BF抑制作用的研究主要集 中于抗生素的研究，目前已发现十四、十五元环大环内酯类抗生素在体外能抑制 P．a形成BFl1]，但有关 中草药对BF影响的研究鲜见报道．本实验主要研究了中草药金银花水煎液在体外对 BF的抑制作用及其 与庆大霉素的协同作用 ，致力于在中草药及 中西医结合抗菌方面有新的突破． 1 实验 材料 (1)菌株 ：铜绿假单胞菌系 1株 ，从安徽中医学院微生物与免疫教研室l临床中分离得到． (2)药物 ：金银花 3Og，购于安徽中医学院第一附属医院中药房，并经过鉴定．水煎 3次，每次煎 30 min合并浓缩成 100 浓度药液 (含生药 1g／mI)。。．庆大霉素 (Gentamicin)(硫酸庆大霉素注射液)，湖 北同济奔达鄂北制药有限公司产品，生产批号：200709141． (3)培养基：MH 肉汤 (Muller—HintonBroth，MHB)、LB琼脂平板 、IB肉汤 、胰蛋 白胨大豆肉汤 (TripticaseSoyBroth)(杭州微生物试剂有限公司，生产批号 ． * 收稿 日期 ：2009—1O-29 作者简介 ：袁秀丽(1984一)，女，安徽省六安市人 ，在读硕士生 ，研究方向：应用微生物 第 1期 袁秀丽等 ：中西医结合抗绿脓杆菌生物膜作用 的研究 ·67 · (4)试剂 ：甲醇 、磷酸为分析纯 (天津市科密欧化学试剂有限公司)；绿原酸对照品(中国药品生物制品 鉴定所)；结 晶紫(天津市光复精细化工研究所)；四甲基偶氮唑盐 (MTT，Sigma公司)；二甲亚砜 (DM— SO，上海金山化工厂)；pH7．4磷酸盐缓冲溶液 (PhosphateBufferSolutions，PBS)，由本实验室配制． (5)检测仪器 ：318C