人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其活性检测.pdfVIP

_ _ 。— — 372 。_。—— ChinJLabDia~n，March，2010，Vol14，No．3 文章编号：1007—4287(2010)03—0372—04 人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其活性检测 吕 爽，雷连成 ，杨 鹏，冯 新，欧阳萍，韩文瑜 (吉林大学畜牧兽医学院，吉林 长春 130062) 摘要：目的 用PCR技术特异扩增人溶菌酶基因}lLYzcDNA序列，克隆至质粒pMD18．T中，获得重组质粒pMD18一 T-hLYZ。方法 采用EcoR I／NotI双酶切及PCR确认正确后 ，将人溶菌酶基因cDNA目的片段亚克隆到毕赤酵母 表达载体 pPIC9k中，通过电穿孔法转化毕赤酵母菌 GSl15，获得重组质粒pPIC9k-hLYZ，采用 EcoR I／NotI双酶切法 及 DNA测序证明cDNA序列完全正确，在毕赤酵母菌中诱导表达产物经SDS电泳分析，结果 表明表达产物与 预期大小的hLYZ蛋白分子量一致，采用微球菌溶解法进行抑菌活性测定。结论 证实具有明显的抑菌作用。 关键词 ：毕赤酵母 ；人溶菌酶；抑菌活性；克隆与表达 中图分类号：R34 文献标识码：A CloningandexpressionofhumanlysozymeinPicMaPastroisandidentificationof theactivity LUShuang，LE1Lian-eheng， YANGPeng，eta1．(CollegeofAninutlSciencearulVeterinaryMedicine，JinlinUni~rsity，hCangchna 130062，China) Abstract：Objective LysozymecDNAofhuman(hLYZ)wasamplifiedbyPCRandclonedintoavectorpMD18一T．Methods ThepositiveplasmidcontainedhumanlysozymecDNA wasd~ermindedbyrestrictionetw meanalysisandPCR．ThecDNAencoding hLYZwassubclonedintopPIC9kandtransferredintoPeihiaPastroisGS115byelectmporation．hprovedthatthepositiverecombinant plasmidpPIC9k—hLYZcontainedeDNAencodinghumanlysozymeby restrictionenzymeanalysisandsequencedetermination．Results Inthepositivetransformants．山ehumanlysozymewasexpressedasafusionproteininPciha／GS115．whichwasverifiedbySDs_ PAGE．BacteriostatieactivityWasverifiedbyMicrococcuslysodeikticuslysistest．Conclusion Theevidentbacteriostaticactionwas verified． Keywords：PichiaPastrois；humanlysozyme；bactefiostaticactivity；cloningandexpression ( JLabD／agn，2010，14：0372) 溶菌酶(LYZ)是一种能水解细菌细胞壁中粘多 酵母 (PiehiaPa~trois)GS115、由本室保存。pMD18一T 糖的f3．1—4糖苷键的胞壁质酶，对革兰氏阳性菌有直 vector购于TaK出a生物工程公司。pPlC9k由本室保 接的溶解作用，在分泌型免疫球蛋白A和补体的参 存。所有细菌培养基配制及培养