结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞的生长抑制作用.pdfVIP

维普资讯 四川 大 学 学 报 ‘医 版 JSichuanUniv(MedSeiEdii：2o…o8；’39(3)…：368—372 结核分枝杆菌 RelE毒素蛋 白对肺癌 A一549细胞的生长抑制作用* 石娅莉，鲍 朗△，商正玲，姚素霞 四川I大学华西基础 医学与法医学院 感染免疫研究室 (成都 610041) 【摘要】 目的 探索结核分枝杆菌 RelE毒素蛋 白是否对肺癌 A一549细胞有生长抑制作用 。方法 采用 PCR 技术克隆结核 分枝杆菌 RelE、RelB、RelBE基 因，分别构建 真核质粒 PcDNA3．1-RelE、PcDNA3．1一RelB和 PcDNA3．1-RelBE。经酶切分析和DNA测序证实重组质粒构建成功后 ，采用脂质体转染方法分别转入肺癌A一549 细胞 ，经RT—PCR鉴定后 ，建立稳定表达相关蛋 白的细胞株 。通过细胞生长 曲线、活细胞蛋 白含量测定、MTT细胞 增殖实验 、HE染色观察细胞凋亡、流式细胞术检测瞬时转染细胞 的凋亡率等 ，观察结核分枝杆菌 RelE毒素蛋 白是 否对肺癌 A一549细胞具有生长抑制和促凋亡 的作用 。结果 结核分枝杆菌 RelE毒素蛋 白组的肺癌 A一549细胞增 殖速度低于其他各组，对营养缺乏更为敏感 ，相同范围视野下凋亡细胞多于其他各组，瞬时转染细胞 的凋亡率也高 于其他组 (PO．05)。结论 结核分枝杆菌 RelE毒素蛋 白对肺癌 A一549细胞具有生长抑制和促凋亡 的作用 。 【关键词】 结核分枝杆菌 RelE 生长抑制 凋亡 【中图分类号】 R378．911 RelE ToxinProteinofMycobacterium TuberculosisInducesGrowth InhibitionofLungCancerA一549Cell SH I Ya—li，BAOLang ，SHANGZheng—ling，YAOSu-xia． DepartmentofInfectandImmunity．WestChinaSchool ofPreclinicalandForensicMedicine，SichuanUniversity，Chengdu610041，China [Abstract] Objective ToinvestigatewhethertheRelE toxinproteinofmycobacterium tuberculosishasa growth inhibitioneffectonlungcancerA-549cel1．M ethods Thecompleteopen—readingframesequencesofRelE ， RelB andRelBE geneswereamplifiedbyPCR with usingM ．tuberculosisH37RvgenomicDNA asthetemplate． TheRelE，RelB and RelBE geneswere subcloned into PcDNA3．1(+ )．Afterbeing verified with restriction endonucleasedigestionandDNA sequencedeterm ination，therecombinantvectorswereappliedtOtransfectlung cancerA一549ceilsby liposometransfectionmethod．Bydeterminingthegrowth curveandprotein levelofliving cells，MTT cellproliferation assay，theapoptosisofceilswith HE staining and theapoptosisrateoftransient transfectioncellsdetectedbyFlow Microfluorimetry．itwasobservedandanalyzedwhethertheRelE toxinprotein ofmycobacterium tuberculosishadagrowthi