光镊捕获金福菇孢子的拉曼光谱分析.pdfVIP

第 27卷 ，第 2期 光 谱 实 验 室 Vo1．27。No．2 2010年 3月 ChineseJournalofSpectroscopyLaboratory March ．2 0 10 光镊捕获金福菇孢子的拉曼光谱分析① 赖钧灼 王桂文 赵承刚“黄庶识 刘敏 刘斌 (广西大学生命科学与技术学院 南宁市大学路 lOO号 530004) “(广西大学应用微生物研究所 南宁市秀灵路 75号 530005) 6(广西科学院生物物理实验室 南宁市大学大岭路 98号 530003) 摘 要 使用光镊拉曼光谱系统俘获悬浮在生理盐水中的单个金福菇孢子，激发并收集其拉曼信号， 结果显示单个金福菇孢子的拉曼光谱基本能呈现其内含物的组成和结构信息，脂类物质是其主要成分。同 种栽培方式的3个不同菌株单个金福菇孢子的平均拉曼光谱信号基本一致，分别对其进行多元统计分析 (PCA)，无法区分其拉曼光谱信号；同一菌株不同栽培方式的单个孢子平均拉曼光谱的差异光谱表明其主 要成分相同，部以脂类物质为主；而源 自于脂类 1743、1655、1442、1125、1080、1070、876、728em 等峰的信 号强度基本一致，说明其脂类的含量基本相同。从单细胞拉曼光谱角度初步分析金福菇孢子 ，为光镊拉曼 光谱技术研究食用菌孢子萌发机理提供有意义的参考。 关键词 光镊 ；拉曼光谱 ；金福菇 中图分类号：0657．37 文献标识码：A 文章编号：1OO4—8l38(2O1O)O2一O545-O5 1 引言 光镊拉曼光谱技术是将光学镊子技术与拉曼光谱技术结合起来的一种简便灵敏的光谱分析新 技术口]，能够在接近 自然生理状态下研究单个细胞，从拉曼光谱的特征峰的位置、强度和线宽可以 获得样品的分子组成及结构信息，从而实现实时观察单个细胞的生化组成、变化，或判别不同类型、 不同状态的细胞，获知掩盖在群体平均信息下的个体生命信息。近年来光镊拉曼光谱技术在细菌 酵母细胞 、淋巴细胞等r。]研究中得到了广泛的应用 ，且研究进展迅速。 金福菇是巨大 口蘑(TricholomagiganteumMassee)、洛巴伊 口蘑(TricholomalobayenseHeim)等 的商品名，巨大 口蘑和洛巴伊 口蘑是同物异名，由法国真菌学家Helm于 1970年在非洲发现，并定 名为洛巴伊 口蘑 。金福菇是一种 口感鲜美，营养丰富的高温型珍稀食用菌，适合于热带地区栽培[6]。 目前人们已经从金福菇的交配型[7]、培养基筛选、栽培模式、有用成分分离利用等方面进行研究，并 取得了显著成效。光镊拉曼技术在食用菌研究中的应用并不多见，特别是以金福菇为研究对象尚未 见报道 。本研究将光镊拉曼光谱技术引入到金福菇孢子研究中，通过比较不同菌株、不同栽培方式 金福菇孢子的拉曼光谱，以寻找金福菇孢子的特征标志光谱，从单细胞拉曼光谱角度初步分析金福 菇孢子，为将来利用光镊拉曼光谱技术研究食用菌孢子萌发机理提供有意义的参考。 ① 广西自然科学基金资助 (桂科自0991039) ② 联系人。电话：(0771)3271407；E—mail：liubin@gxu．edu．an 作者简介 ：赖钧灼 (1985一)．男，广东省湛江市人，在读硕士，研究方向：资源与环境微生物学。 收稿El期：2009—07—21；接受 日期：2009—09—02 光谱实验室 第 27卷 2 实验部分 2．1 材料 菌株 TG一1、TG一2和 TG一3由广西大学应用微生物研究所提供 。按常规方法进行袋式熟料栽 培，菌丝长满袋后采用带袋或脱袋方式进行覆土栽培 ，出菇后分别收集孢子备用。 2．2 实验系统及方法 实验系统与文献 [1，8]描述相似，由一台波长稳定的 TCLDM9一TEC半导体激光器 (美 国 Thorlabs公司)激发出一束波长为 780nm的激光，经过滤光，被导人到一台TE2000U尼康倒置生 物显微镜(日本Nikon公司)，激光束途经油浸物镜(N．A．1．30，100X)，聚焦后在焦点附近形成了 一 个单光束光势