真性红细胞增多症患者JAK2基因突变分析.pdfVIP

·38 · JournalofClinicalHematology，Jan2010。Vol23No1 · 经 验 教 lI · 真性红细胞增多症患者 JAK2基 因突变分析 田红 陈捷 陈涛 王水 良 吴颖 [关键词] 真性红细胞增多症 ；JAK基因；突变分析 [中图分类号] R555．1 [文献标志码] B [文章编号] 真性红细胞增多症 (polycythemiavera，PV)是 一 种起源于造血干细胞的克隆性增生性疾病 ，以红 细胞数量及容量增大导致一系列症状为临床特征 。 自2005年以来发现 JAK2V617F突变在 PV 中有 较高的发生频率 。我们分析了我院 2005年 1月一 2007年 12月诊治 的31例确诊 PV患者 中该突变 的发生率及其临床特征，探讨其在诊断中的价值 。 1 资料与方法 1．1 病例资料 c c ^ t ^ T l r0 tcTctGaljeoc． 31例 PV患者诊断参照 2001年 wH0PV 的 诊断标准。31例患者 中男 23例 ，女 7例；年龄 27 ～ 7O岁，中位年龄 48岁 。初诊时 Hb185～230g／ L，HCT56 ～68 。正常对照 10例，选择我院体 检中心查体无异常发现者。 1．2 方法 ’ 基因组 DNA制备 ：抽取患者骨髓或外周血 G ▲ c T Ii c 0 tc ct c▲c▲ 2ml，盐析法提取 白细胞基 因组 DNA。调整 DNA 的终 浓度 为 100～ 200mg／L。PCR扩增 参考 Steensma等n方法进行引物设计和 PCR检测。琼 脂糖凝胶电泳 ：产物经 20g／L琼脂糖凝胶 电泳后 紫外光透视仪分析 图像并照相 基因测序 ：PCR扩 增产物经过纯化后 ，由上海英骏生物技术公司进行 测序 ，将所得到的测序结果与野生型基因序列进行 对 比。 白上而下分别为野生型、杂合子突变及纯合子突变 图 1 基 因测序结果 2 结果 PCR扩增片断长度为 430bp，测序证实 31例 克隆的生成 ，引起 PV 。除了PV外 ，该突变在 PV 患者 中 JAK2基 因 V617F 突变 27例 ，占 特发性血 小板增多症 (ET)、特发性骨髓 纤维化 87．1％。其中纯合子突变 22例 ，占81．4 。正常 (MF)以及骨髓增生异常综合症 (MDS)中也有一定 对照标本中未检测到该突变 。测序结果见图1。 的频率。ET患者 中的检出率 40 ～50％，而 MF 3 讨论 2005年几个研究小组发现 JAK2V617F突变 患者的检出率则略高于ET。 在 PV患者 中有较高的发生频率，该突变位点在基 经过近几年的研究 ，JAK2V617F突变对骨髓 因DNA序列的第 1849位 (GT)，导致编码蛋 白 增殖性疾病 中的作用 已较为 明确。WHO推荐将 第 617位由缬氨酸代替了原有的苯丙氨醚 引起该 对该突变的检测列人骨髓增殖性疾病的诊断标准 基 因编码 的酪氨酸激酶活性增高 ，导致内生性红系 之中，尤其是作为PV 的主要诊断标准0 。我们 的实验也证实我 国PV患者中该突变发生率较高， 南京 军区福 州总医院血液科 (福 州，350025) 。南京军区福州总医院实验科 将突变检测作为