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利用 HILIC 和反相色谱法分析促红细胞 生成素糖肽和糖型 应用简报 生物制药 作者 前言 Alex Zhu, James Martosella ，及 肽图分析是一种综合表征蛋白生物治疗药物的重要技术。通常采用反相UHP C/HP C 法 Phu T Duong 进行分析，但是如果消化物中含有亲水性多肽，例如糖肽，则会丢失一些重要信息。本 安捷伦科技公司 应用简报报导了将Agilent ZORBAX 快速高分离度300-HI IC 1.8 µm C 色谱柱与飞行时 间质谱 联用，可实现糖蛋白红细胞生成素 （ ，一种控制红细胞生成的糖蛋 (TOF MS) EPO 白激素）消化物的肽图分析。利用 HI IC （亲水作用色谱）流动相中的高有机溶剂体系， 可在 HI IC 色谱柱上实现糖肽的有效溶解、保留及分离。本应用简报通过比较分离效 果、序列覆盖率以及反相和 HI IC 数据，证实了HI IC 是 RP C/MS 多肽分析的一种正 交、互补的方法。 实验部分 质谱条件 气体温度： 350 °C 样品制备 气体流速： 10 /min 胰蛋白酶消化后的EPO 糖肽样品购自Bio Creative 公司 （纽约州 雾化器： 45 psi 雪莉）；将 100 µ 样品(2 mg/m ) 分别与100 µ HI IC 或 RP 毛细管电压： 3,500 V 洗脱液 溶剂适当混合。 裂解电压： A 170 V 操作条件 扫描速率： 2 spec/s 质量数范围： 400 至3,200 m/z 实验在UHP C/TOF 系统上进行，该系统包括Agilent 1290 Infinity C 系统，以及配有双 ESI 源 （正模式）的精确质量6224 TOF C/ 结果 讨论 MS。采用不同的 HI IC 和反相条件，对胰蛋白酶消化 EPO 蛋白 后所得的多肽进行分离。 反相和亲水作用色谱中多肽的洗脱顺序是正交的。在反相分离 中，多肽洗脱以疏水性的增加为顺序，疏水性最小的最先被洗 HILIC 条件 脱，但是在亲水作用色谱中，疏水性最小的多肽会最大限度地保 色谱柱： Agilent ZORBAX 快速高分离度300-HI IC ， 留在色谱柱中。因此，两者的洗脱顺序相反。与反相