黑曲霉变种RM48 α%0x002D%半乳糖苷酶分离纯化及酶学性质的研究.pdfVIP

浙江大学学报 (农业与生命科学版) 35(2)：147～152，2009 JournalofZhejiangUniversity(Agric．g-LifeSci．) 文章编号 2009)02—0147—06 DOI：10．3785／j．issn．1008—9209．2009．02．005 黑曲霉变种 RM48I】一【半乳糖苷酶的分离纯化及其酶学性质研究 许尧兴，李艳丽，柳 永，许少春，姚晓红 (浙江省农业科学院 植物保护与微生物研究所．浙江 杭州 310021) 摘 要 ：经硫酸铵沉淀、疏水柱层析和分子筛层析 ，从黑 曲霉变种 RM48(AspergillusnigervTiegh RM48)固体发酵后 的浸提液 中分离纯化 了a一半乳糖苷酶 ．SDS分析表 明，此酶蛋 白的分子量约 为 108kDa．酶学性质研 究表 明，该酶 的最适反应温度是 6O℃，耐热温度为4O℃；最适反应 pH 为 4．5， 在 pH 3．O～6．0之 间保持 9O％以上的酶活性 ；在实验 的金属离子范围内，所有金属离子对黑 曲霉变种 RM48。半孔糖苷酶均有抑制作用，其 中Cu 和 Fe一抑制作用最为显著，I 、Zn 、Mn’。、K 、Na一、 Ca!、Mg：和 Co 对酶活性 有轻 微 的抑 制 作 用 在 pH 4．0和 6O℃反 应条件 下此酶 的 K 为 7．37 mmolL ，…为56l8IU mg～．min ．成熟酶蛋 白N端序列为 DEKAYSPCYY，与 已报道 的 a一半乳 糖苷酶蛋 白无 同源性 关 键 词 ：黑 曲霉变种 RM48；a一半乳糖苷酶 ；分离纯化；酶学性质 中图分类号 ：Q814 文献标识码 ：A XU Yao—xing，I．Iran—li，LIUYong，XU Shao—chun，YAO Xiaohong(InstituteofPlantProtectionand Microbiology，ZhejiangAcademyoJAgriculturalS(’iences．Hangzhou3j0021，China) Purificationand characterization oftx-galactosidasefrom AspergillusnigerV．Tiegh RM48．Journalof ZhejiangUniversity(Agric．＆ LifeSci．)，2009，35(2)：147—152 Abstract：An extracellulara—galactosidase from Aspergillusniger v．Tiegh RM48 was purified to apparenthomogeneitybyammonium sulfate (8O saturation)precipitation，PhenylSepharoseCI一4B hydrophobiecolumn chromatography and Sephadex G—100 filtration chromatography． The specific activityoftheenzymewasincreasedapproximately 103一fold，from 26．29IU mg protein tO 2722，3 IU · nag protein．ThemolecularmassofthepurifiedenzymeasdeterminedbySDS—PAGE was108kDa． Theoptimum pH andtemperatureofthisagalactosidasewerepH 4．5and 60 ℃ ，respectively．The enzymewasstablebetweenpH 3．0andpH 6．0，however．itsactivitywasinhibitedbyalltestedmetal ions．a—Galactosidaseactivitywasstrongly inhibitedbyCu ，Fe一andmoderatelyinhibitedbyLi ， Zn一 ，Mn一，K一，Na