离子交换法分离固相合成胸腺五肽.pdfVIP

离子交换与吸附，2005,21(3):233--240 IONEXCHANGEANDADSORPTION 文章编号:1001-5493(2005)03-0233-08 离子交换法分离固相合成胸腺五肤’ 陈永森 姚 忠** 邱竿 竺凯 马 品 李鑫 应汉杰 南京工业大学制药与生命科学学院，南京210009 摘要:采用离子交换法分离纯化，对影响分离的多种因素包括吸附动力学、pH值、缓冲液和 树脂的种类进行了深入讨论.结果发现，采用SPsepharoseFF树脂、pH4.4的醋酸缓冲液分离 效果较好，经过方案优化，在pH4.4醋酸缓冲液平衡、盐梯度洗脱条件下纯化TP5,HPLC和 质谱分析表明，一步分离纯度可达98%以上.该法可以满足大规模制备的要求. 关键词:胸腺五肤;离子交换;分离 中图分类号:0647.3 文献标识码:A 1前 言 随着近几年对非典、艾滋、癌症类药物需求的增加，国际上对肤类药物和肤类试剂研 究的速度正在加快。生物提取肤己经不能满足市场及药物研发的需求，合成肤技术 ((SPPS) 得到了迅速发展。其中，固相合成己经成为主流技术之一，目前已具备大规模合成能力。 R BOCHN R 0 0 NHBOC ~，.~ 勺- ~ ~ .月一 勺~...~- ~今 NH2 R O 1.CF3000H - 今 NH沪冲Y产NH2 2.NEt3 Fig.1.MechnaismofSolidPhaseSynthesis SPPS由于其特殊的合成策略，给产品的分离纯化带来了一定的困难，如:当肤合成 初始时，由于肤链较短，其产品 (如二肤、三肤等)的性质差异是非常显著的，分离难度 不大，而随着肤链的进一步延长，每接上一个氨基酸对产物整体性质的改变就越发不明显 收稿日期:2004年11月5日 项目基金!国家863基金项 目(2003AA219040) 作者简介:陈永森 (1978-),男，浙江省人，硕士研究生. 中*通信联络人 .234. IonExchnagenadAdsorption 2005年6月 了，如20肤和21肤在色谱柱中的行为就非常接近;此外，由于是连续反应，每一步氨基 酸的缩合收率都必须达到一定的水平，否则所需的最终产物浓度将是痕量的;第三，由于 接在肤链上的氨基酸通常都带有活性侧链，如果不对这些侧链进行保护 (封闭)，将产生一 系列的副产物，对产物纯化提出了更高的要求[I]。通常，利用固相合成技术制备的粗肤多 是采用反相技术 (RP-HPLC)分离，该技术要求在高压条件下进行，必然造成设备能耗高、 成本高，也难以扩大规模[2,31。因此，寻找一种高效、大规模、低成本的纯化和制备方法有 着巨大的经济价值。 胸腺五肤 (TP5)是合成的五肤，TP5是胸腺生成素II上的活性中心第32位一36位氨 基酸序列，具有胸腺生成素II的全部生理功能4[]。主要生理功能是诱导T细胞的分化、增 殖和成熟，临床上主要用于治疗肿瘤、单纯疤疹、类风湿性关节炎、艾滋病、严重免疫缺 陷综合症、慢性乙型肝炎[5,6]0 TP5的分子式是C3oH49N909，分子量679.41Da，文献报道等电点是pH9.9[71，化学式: NH2-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH 本文针对TP5，探索建立一种基于离子交换的小肤纯化技术，作为RP-HPLC技术的补 充，以满足大规模合成肤制备的要求。