对虾甲壳形成机理初步研究.pdf

对虾甲壳形成机理初步研究 中文摘要 本文以中国明对虾和凡纳滨对虾的甲壳为研究对象，应用x一射线衍射技术 和傅立叶变换红外光谱技术、氨基酸组成分析以及SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳技 术，对两种对虾甲壳无机相(碳酸钙晶体)的晶体组成特点和有机相(几丁质和 蛋白质)的组分以及晶体的沉积规律进行了分析，旨在为对虾甲壳形成机理研究 提供理论基础。研究结果总结如下： 用傅立时变换红外光谱技术(FTIR)分析对虾甲壳结果显示，对虾甲壳中 cm～、2962 含有大量几丁质和其它多糖，几丁质为a一几丁质，特征光谱为3285 C1TI～、2932C1TI～、2885 CITI1。碳酸钙晶体主要以方解石形式存在，特征光谱为1420 cm-1、875 cm-‘。对从对虾甲壳中提取出来的可溶性蛋白及不可溶性蛋白进行FTIR cnl～、1656-1658 分析的结果表明，酰胺I带分别位于1649—1652 em。吸收区，酰 cml、1537．1540 胺II带分别位于1519．1526 cm。吸收区。可以推测酰胺I带都 采取u．螺旋构象，酰胺II带在可溶性蛋白中采取反式平行B-片层，在不溶性蛋 白中采取平行B．片层。不溶性蛋白与可溶性蛋白相比，无酰胺III带，但增加了 酰胺IV、v、VI带。另外，不溶性蛋白的993．995cm“吸收区检测到一峰，可能 为P04。。X．射线衍射分析图谱显示在d值为9．6677和4．4803埃处检测到几丁质 的特征峰，表明有大量的n一几丁质存在；在d值为3．0436、2．4967埃等位置检 测到方解石的特征峰：在凡纳滨对虾中，d值为3．4582、3．3803处检测到的微弱 峰可能为霰石或球霰石，与中国明对虾相比，其(104)面生长的方解石峰显著 较弱。 SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明，可溶性蛋白大多为小分子量蛋白 质，分子量介于6-30kDa，不可溶性蛋白集中于中分子量范围，分子量介于 20—60kDa，最小分子量大于llkDa：中国明对虾的不同生长阶段以及中国明对虾 与凡纳滨对虾之间，可溶性与不可溶性蛋白都存在一定的差异，但总体上相似度 较高。就提取方法而言，对于可溶性蛋白，HCI适合提取高及中分子量蛋白质， HAc和iris适合提取低分子量蛋白质，但HAc效果比Iris更好：对于不可溶性 蛋白，EDTA—Urea难以提取到高分子量蛋白质，SDS．DTT和巯基乙醇．饱和盐酸 胍效果较好。几乎每种可溶性蛋白质提取物都可分离到位于20·21kDa、16—18kDa 对虾甲壳形成机理初步研究 和14-1 5kDa附近的三条带，而几乎每种不可溶性蛋白质提取物都可分离到位于 60-65kDa、44-48kDa、29—32 kDa、33—36 kDa和17-20kDa(二条带)附近的六 条带。 氨基酸组成分析数据显示，从对虾甲壳提取的可溶性及不可溶性蛋白均检测 不到半胱氨酸，甲硫氨酸含量小于1％，即缺乏含硫氨基酸。可溶性蛋白富含小 and and 侧链氨基酸(Ala Glu：24—27％)，羟基 Gly：24．26％)和酸性氨基酸(Asn 氨基酸含量相对较高(Ser andThr：11．13％)；而不可溶性蛋白质富含小侧链氨基 and and 酸(Ala Glu：17．19％)和羟基氨基酸含 Gly：25·27％)，酸性氨基酸(Asn 量相对较高(SerandThr：15．17％)。不可溶性蛋白的疏水氨基酸含量明显高于可 溶性蛋白。