鳡鱼胚胎发育与群体遗传多样性分析.pdf

摘要 摘 要 鳡鱼(Elopichthys bambusa)为大型上等经济鱼类，广泛分布于我国各大江河 湖泊之中，但近年来，由于水质恶化、水利工程建设等因素致使鳡鱼的天然资源 急剧萎缩，现已被列入国家重点保护濒危及受威胁水生生物种名录。本研究对鳡 鱼的胚胎发育、遗传多样性和种间鉴定三个方面进行了研究探讨。 1. 以人工繁殖所得的受精卵为材料，观察了长江鳡鱼(E. bambusa) 的胚胎发育过 程，对各个发育期的形态特征进行了描述和显微照相。结果表明：长江鳡鱼受精 卵圆球形，平均卵径为 2.0-2.5mm ，吸水膨胀后平均卵径为 7.5-8.5mm，为非粘 性漂流性卵；受精卵孵化分为胚盘阶段、卵裂阶段、囊胚阶段、原肠阶段、神经 胚阶段、器官分化阶段和出膜等 7 个阶段；在温度为 22-25 ℃、长江江水中，长 江鳡鱼胚胎发育历时 27h45min 孵出仔鱼，总积温为 663℃·h。 2. 利用 ISSR 和 AFLP 分子标记技术对长江下游苏州段野生和野生 F1 代人工养 殖的两个鳡鱼(E. bambusa)群体遗传多样性进行分析研究。从 77 个 ISSR 引物中 筛选出4 个引物对鳡鱼两个群体48 个样品进行扩增，得到41 个清晰的扩增位点。 鳡鱼野生和野生F 代人工养殖两个群体的多态位点比率和 Shannon’s 指数分别为 1 21.95% 、17.07%，0.0724、0.0426 。基因分化系数 Gst 和 Shannon’s 指数估算分 析均显示两个鳡鱼群体之间出现一定遗传分化。鳡鱼 UPGMA 系统树有较明显 的歧化，表现出一定的遗传趋异。6 对 AFLP 选择性引物在两个群体 47 个个体 中，共扩增出313 个位点，多态位点 47 个。鳡鱼野生和野生 F1 代人工养殖两个 群体的多态位点比率为 13.42%、8.31%，Shannon’s 指数为 0.0544、0.0320 ；前者 遗传多样性较后者略高。基因分化系数 Gst 和 Shannon’s 指数分析均显示两个鳡 鱼群体之间出现一定遗传分化。鳡鱼 UPGMA 系统树有分支且依据群体分别聚 类，表现出一定的遗传趋异。结果分析表明，鳡鱼群体的遗传多样性相对贫乏； 野生 F1 代人工养殖群体尚未形成自己独立的遗传结构，但两个群体间已经产生 了一定的遗传分化，经过较多世代的人工繁育有可能形成自己独立而稳定的遗传 结构。 3. 用 3 个 ISSR 引物对鳡鱼(E. bambusa) 、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和赤眼 鳟(Squaliobarbus curriculus)进行简单重复序列区间扩增 (ISSR)遗传分析。结果 发现：(1)三种鱼类的种间遗传相似度以鳡鱼和草鱼之间为最高(0.7157)，鳡鱼和 赤眼鳟之间为最低(0.3041) ；遗传分化系数 Gst 均大于 0.9 并且鳡鱼和草鱼的遗传 分化系数最大(0.9806) ；UPGMA 系统树显示三种鱼类分为两支，鳡鱼和草鱼首 先聚在一起，最后与赤眼鳟聚类。(2) 3 个引物均具有种的特异性扩增带。其中 I 摘要 引物 ISSR8 扩增的 1550 和 760bp 带，引物 ISSR62 扩增的 700bp 带，引物 ISSR76 扩增的 790bp 带为赤眼鳟的特异性谱带；引物 ISSR8 扩增的 2000 和 1875bp 带， 引物 ISSR62 扩增的 1380bp 带，引物 ISSR76 扩增的 1240 和 520bp 带为鳡鱼和 草鱼的共有特异性谱带；引物 ISSR8 扩增的 1190bp 带为鳡鱼和赤眼鳟的共有特 异性谱带；引物 ISSR8 扩增的 1340 和 1000bp，引物ISSR76 扩增的 2000bp 带为 草鱼和赤眼鳟的共有特异性谱带。结果表明：鳡鱼、草鱼和赤眼鳟的遗传差异显 著，分类地位至少在种的水平上，这与三种鱼的形态分类在属的水平是一致的， 同时揭示了鳡鱼和草鱼的亲缘关系较赤眼鳟与二者的亲缘关系还是较近的；找到 了 3 个引物共