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高通量筛选瞬时受体势 V3 通道调节剂细胞模型的建立.pdf
生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, November 25; 24(11): 1895-1901
journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
研究报告
高通量筛选瞬时受体势V3 通道调节剂细胞模型的建立
1,2 1,2 1,2 1,2
王少鹏 , 李际仙 , 彭志刚 , 曹婧
1 中国科学院北京基因组研究所, 北京 101300
2 中国科学院研究生院, 北京 100039
摘 要: 为发现 TRPV3 调节剂, 通过荧光成像分析系统检测钙浓度, 建立高通量筛选瞬时受体势 V3 通道(Transient
receptor potential V3, TRPV3)调节剂的细胞模型。将TRPV3 表达载体转染人胚肾(HEK-293)细胞, 抗生素筛选稳定表达
TRPV3 的细胞系, 选取 TRPV3 特异性调节剂作用于细胞模型, 应用荧光成像分析系统测钙实验检测 TRPV3 高表达细
胞系药理学特征, 同时优化实验条件, 考察模型的稳定性, 并评估应用于 96 孔板及 384 孔板进行高通量筛选的可靠性
及准确性。获得了高表达TRPV3 的HEK-293 稳定细胞系, 通过TRPV3 离子通道调节的钙流信号与TRPV3 特异性调节
剂成剂量依赖关系, 优化得到了最适筛选条件, 该模型稳定, 灵敏, 通过Z 因子及Spiking 检测, 完全符合高通量筛选需
求。利用此细胞模型通过检测钙信号可筛选TRPV3 调节剂。
关键词: TRPV3, 高通量筛选, 细胞模型
Establishment of a Cell Based High Throughput Screening
Model for Transient Receptor Potential V3 Modulators
Shaopeng Wang1,2, Jixian Li1,2, Zhigang Peng1,2, and Jing Cao1,2
1 Beijing Genomics Institute, Chinese Academy of Sciences, Beijing 101300, China
2 Graduate University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039, China
Abstract: We established a cell based high throughput screening model by calcium assay on fluorometric imaging plate reader for
finding modulators of TRPV3. The TRPV3 expression vector was transfected into HEK-293 and stable cell line expressing TRPV3
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