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变形链球菌gtf 在不同蔗糖浓度下的差异性表达1 * 陆玉，刘天佳 ，杨锦波 四川大学华西口腔医学院，成都（610041 ） E-mail ：liutianjia822@163.com 摘 要：目的检测具有不同产胞外多糖能力的变形链球菌株在不同培养条件下产胞外多糖 (EPS)的能力及其与 gtfA,B,C,D 表达变化的关系。材料与方法 选取高产糖与低产糖的临床 分离株各 10 株及标准株 UA159 ，用蒽酮法分别检测其在 1%蔗糖和 2%蔗糖培养条件下产 EPS 的能力。再以real-time PCR 方法检测在这些条件下与变链产糖能力密切相关的毒力因 子gtfA,B,C,D 的表达变化。结果 蔗糖在各菌株均能诱导EPS 的产生。在1%蔗糖浓度下， 高产糖株与低产糖株的gtfA,B,C,D 表达均有不同程度升高。在2%蔗糖浓度下，低产糖株的 gtfB,C,D 表达均不同程度降低，gtfA 略有升高；高产糖株的 gtfB,D 表达略有升高，gtfA,C 略有降低。结论gtfs 的表达水平与变形链球菌的致龋力密切相关。 关键词：变形链球菌，葡萄糖基转移酶，real-time PCR 龋病是一种细菌感染性疾病，其发生以致龋菌在牙面的粘附为首要条件。变形链球菌 是主要致龋菌，它能够以蔗糖为底物合成的细胞外葡聚糖，介导细菌对牙面牢固的粘附，从 而增强变链致龋作用[1] 。葡萄糖基转移酶（GTFs ）是变形链球菌自发合成的固有酶，可以 特异性的以蔗糖为底物合成细胞外葡聚糖，变形链球菌至少产生三种葡萄糖基转移酶 GTFB，GTFC，GTFD，是变链重要的毒力因子。 GTFB 主要合成水不溶性葡聚糖；GTFC 既合成水不溶性葡聚糖又合成水溶性葡聚糖； GTFD 主要合成水溶性葡聚糖。以往对GTFs 的研究发现这些酶紧密相关且其产物有免疫学 上有交叉反应，因此对其产物进行免疫学上的研究较为困难[2] 。gtfB 和 gtfC 在基因组中呈 前后邻接排列，其表达似乎有很强的相关性，但是也有研究显示gtfB 和gtfC 有不同的启动 子[3] 。故对GTFs 编码基因gtfs 在蔗糖依赖性粘附中的动态表达，我们还知之甚少。同时有 [4] 报道称编码蔗糖磷酸化酶的gtfA 也与变链的蔗糖依赖性粘附有密切关系 。 另外，本课题组前期的实验发现，部分高龋患者仅能分离出低致龋毒力株，而部分无 龋患者仍能分离出高致龋毒力株，这仅由变形链球菌的血清型和致龋毒力因子遗传多态性难 以完全解释，由此认为变形链球菌致龋毒力因子表达水平也影响龋病的发生。real-time PCR 是一种敏感、高效且可靠的定量检测 RNA/DNA 的方法。本实验的目的即定量的检测变形 链球菌在不同蔗糖浓度条件下gtfs 的表达变化。 1 实验材料和方法 1.1 菌株和培养基 菌株采用本课题组前期研究所获的变链菌(血清型 c) 临床分离株 20 株和标准菌株 UA159 。培养基采用TPY 培养基。 1.2 合成细胞外多糖试验 冻干变形链球菌临床株复苏、形态学鉴定后接种于TPY 固体平板，厌氧培养48h ，挑 取单菌于相同条件下培养24h 增菌。按照菌液与培养基 1:10 （v/v ）比例接种于以下三种不 同的培养基：含1%葡萄糖的TPY 培养基（对照组），含1%和2%蔗糖的TPY 培养基。37℃ 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金的资助。 - 1 - 厌氧培养16h，离心，弃上清液。用蒽酮法测定水溶性和水不溶性葡聚糖含量。每个样品一 式三份。 1.3 real-time PCR 对各基因的定量检测 1.3.1 RNA的提取：根据以上合成细胞外多糖试验，