苍耳提取物对番茄灰霉病菌作用机理研究.pdfVIP

苍耳提取物对番茄灰霉病菌作用机理的研究 兰清秀 甘肃农业大学草业学院，兰州(730070) 摘 要：本试验以番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea Pers.)为供试材料，采用测量、显微观测和室 内生理生化分析的方法，对苍耳提取物的抑菌机理进行了初探。结果表明：苍耳提取物对番 茄灰霉菌的菌丝生长、分生孢子的形成和萌发都具有较强的抑制作用，当处理浓度为 30mg/mL 时，苍耳提取物对番茄灰霉菌菌丝生长的抑制率达78.1% ，对分生孢子形成和萌发 的抑制率分别为85.1%和77.4%。通过对培养番茄灰霉菌的培养基（含苍耳提取物）电导率 测定，苍耳提取物可造成番茄灰霉菌菌丝细胞膜透性的变化，引起菌丝体内含物的渗漏，导 致液体培养基电导率增加，灰霉菌菌丝体可溶性蛋白含量下降。 关键词：苍耳提取物；番茄灰霉病菌；作用机理 从植物中寻找有生物活性的物质，是开发、研制新型农药的有效途径之一。我省气候多 样，地理环境复杂，干旱少雨，造就了植物良好的抗逆特性，在开发植物源农药方面有着良 好的资源优势。植物之所以被认为是化学合成杀菌剂替代品最好的开发资源，最重要的一点 就是植物是生物活性化合物的巨大天然宝库，其产生的次生代谢产物超过 40 多万种[1] 。近 年来，吴文君等[2,3]对卫矛科植物苦皮藤的研究较为深入，分离制备了具有杀虫活性的新化 合物，开发出 0.2%苦皮藤素乳油。孟昭礼等[4,5]从银杏中分离出了对植物病原菌有较高活性 的化合物，人工模拟合成并开发出“绿蒂”农用杀菌剂系列产品。 苍耳（Xanthium sibiricum Patr.ex Widd ），属菊科植物，全株有毒，适应性强，是农田、 荒野、草地、田埂沟边、果园的常见杂草[6] 。苍耳作为中药历史悠久，但作用植物源农药的 研究和应用很少。杨顺义、郭东艳等对苍耳提取物杀菌活性进行了研究，苍耳对蔬菜上常见 病菌有较高的抑制作用，尤其是对番茄灰霉病菌[7,8] 。为了能给植物性杀菌剂苍耳素的进一 步开发利用提供理论依据，本试验就苍耳提取物对番茄灰霉病病菌的作用机理进行了初步研 究。 1 材料与方法 1.1 供试材料 1.1.1 供试植物样品 苍耳（Xanthium sibiricum Patr.ex Widd ）采自甘肃兰州刘家堡乡水渠附近，采集部位为 地上部。采回后将苍耳各组织洗净，置于阴凉处晾干后进行粉碎，过 40 目筛（∮=0.37mm ） 后密封，置于 0～4 ℃冰箱中保存备用。 1.1.2 植物样品提取物的制备 连续回流提取法，取粉碎的植物样品 50g 装入滤纸桶中，以丙酮作为溶剂，在索氏抽提 器中回流提取 48 小时，提取液用 RE-52AA 旋转蒸发仪浓缩至少量转入刻度试管中，用丙酮 定容至 2g/mL （即1mL 提取液相当于 2g 植物干样品），密封，在 0～4 ℃ 冰箱中保存备用。 -1- 1.1.3 供试菌种 番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers. ），采自甘肃兰州刘家堡乡蔬菜大棚内的番茄病果上。 经分离纯化后，在 PDA 培养基上保存备用。 1.1.4 主要仪器及试剂 仪器： 标准筛（40 目）、ZDX-35B 型座式自控电热压力蒸汽灭菌锅、索氏抽提器、 RE-52AA 旋转蒸发仪、电导率仪(DDS-11A 型) 、752 型紫外分光光度计、低温冷冻高速离 心机、恒温振荡器等。 试剂：考马斯亮蓝 G-250、95%乙醇、Tris 试剂、85% （w/v ）磷酸、盐酸等。 1.2 试验方法 1.2.1 苍耳提取物对番茄灰霉病菌抑制作用的观测 苍耳提取物对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用 试验采用生长速率法[9]测定了苍耳提取物在 0.005g/mL 、0.010g/mL 、0.020g/mL 、 0.025g/mL 、0.030g/mL 五个供试浓度下对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用，以丙酮作为 对照，每处理重复 3 次（以下同）。 在无