农杆菌介导的苜蓿遗传转化体系的建立与优化.pdfVIP

摘 要 盐碱胁迫是限制作物生产最严重的非生物胁迫因素之一。许多研究者正在培育耐盐 作物新品种来适应和利用盐碱地。然而，植物耐盐能力是一个非常复杂的生理性状，传 钪育种很难大幅度的提高植物的耐盐能力，通过基因工程手段能够很好的解决这个难 题。目前，随着分子生物学及生物技术的迅速发展，已经发现了一些与耐盐相关的新基 因，并获得了耐盐能力相对提高的转基因植株。紫花苜蓿(拟甜却s讲砌L)为世界 范围内广为种植的多年生优质豆科牧草。利用基因工程技术提高苜蓿耐盐性，获得抗逆 新品系，将对我国牧草业发展有重要的现实意义。本研究的目的是建立并优化苜蓿高频 生物技术改良苜蓿品质搭建基础平台。 基因型是限制遗传转化的关键因素之一，选择高频再生基因型是苜蓿遗传转化成功 的保障，本试验从7份紫花苜蓿供试材料中成功的筛选到一个具有高频再生潜力的基因 型——公农．1号。 建立了苜蓿胚性愈伤悬浮培养系统，对影响悬浮培养的两个主要因子一胚性愈伤接 种量和悬浮培养转速进行优化，确定了本实验悬浮培养最佳接种量为3鲋0IIll，悬浮培 养理想转速为12m／min。 建立超声辅助农杆菌介导苜蓿胚性愈伤遗传转化系统，以悬浮胚性愈伤作为实验材 料，应用超声波辅助农杆菌介导法，成功的建立了苜蓿遗传转化体系。在实验过程中， 优化了影响苜蓿遗传转化的因素，包括超声波最佳处理时间(8s)、AS最佳使用量 转基因植株的分子检测，在本试验中成功的获得了15株抗性植株，PCR检测证实 外源基因已经整合到苜蓿的基因组中。 本实验成功的建立了苜蓿体胚高频再生体系，在此基础上通过农杆菌转化法成功的 筛选到转基因植株，为苜蓿遗传转化的理论和应用研究提供了有效的方法。 关键词：基因转化体系；农杆菌介导；胚性愈伤；悬浮培养；苜蓿 Abstract Salt-础kalisn．essisoneof血emost i11 the iInpo咖lt￡狐torsiI“bitillgproductiVi锣of iIl researchcrsare towardtlle ofsalt-tolerallt cr叩s worldwide．Many aiming breeding crop saIiIle in cultivarstoutil娩e t0Ieranceis soil．HoweVer，salt plant． complexphysiolo百cal仃aits methodis t0 salttolemce may TraditioI谢breedingdimcultyimpr0Ve ofplallts．Theproblem bedissolVed oftlle moleculara11d byapplicationgeneticengiIlee血g．Atpresent，wimbiology tosalt—stresshaVebeenfoundiIl biotecllIlologyd【eVelopments，somegenesresponding many the haVe a of aIld oftllese ob幽ed n_uI】nbers species application large plant