两株香蕉内生细菌的分离鉴定及其对香蕉枯萎病的生防效果评价.pdf

摘 要 vaLsicular 本研究从香蕉枯萎病(BallanaWilt)重病园区，生长正常的香蕉假茎内 分离获得两个菌株B215和E353。通过离体拮抗测定和对小苗生防效果评价，确认 防作用。其次在确定两菌株分类地位的基础上对其培养条件、定殖状况、致病性、拮 抗机理等做初步研究。结果如下： 1、通过组织研磨法从香蕉假茎内分离出B215和E353两个菌株，通过对峙培养 和孢子萌发抑制初步测定，B215、E353对香蕉枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、香蕉弯孢 霉叶斑病菌、香蕉链格孢叶斑病菌菌丝生长和孢子萌发均具有良好拮抗效果。B215 培养液滤液使香蕉4种病菌真菌分生孢子和菌丝畸变膨大成球状或串珠状，其硒。 孢子，致畸膨大成絮状或串珠状，其鹏。分别为4．57％、6．14％、4．48％和7．59％。 rDNA序列测定，对筛选的两株拮抗细菌 2、通过形态学特征、生理生化和16S B215、E353进行了鉴定。 形态特征、生理生化试验显示，B215菌落乳白色，革兰氏染色阳性，石蕊牛奶 不产酸。淀粉水解、硝酸盐还原反应、明胶液化均为阳性。氧化酶反应为阴性。可以 或珊瑚形的边缘。革兰氏染色阴性。对红霉素敏感。硝酸盐还原、果胶水解均为阳性。 明胶液化、淀粉水解均为阴性。不能在7％NaCl和pH5．7的培养基上生长。按照《植 物病原细菌学》、《伯杰细菌鉴定手册》鉴定手册相关的分类检索表，将E353鉴定为 欧文氏菌(西w加缸)。 利用PCR技术分别扩增两个菌株16SrDINA序列并测序，将测序结果在NCBI (肋cf批s”6疗凰)相应序列具有loo％的同源性，二者在所构建的系统发育树上处于 同一个分支；E353与已报道的欧文氏菌属菊欧氏杆菌(肌加缸c办垆硎胁啪f)相应序列 具有99％以上的同源性，在构建的系统进化树上与菌株距离最近。 根据上述形态特征、生理生化和16S rDNA序列分析结果，将B215鉴定为枯草 芽孢杆菌(丑s甜6，玎捃)，将E353鉴定为欧文氏菌属菊欧氏杆菌(肌加细幽椰册历绷f)。 3、两株拮抗内生菌对香蕉枯萎病的生防效果评价，通过室内平板对峙培养、分 生孢子萌发抑制悬滴法，菌株传代的拮抗稳定性测定，并在优化两个菌株的培养条件 的基础上，进行温室小苗试验。 对峙培养显示，B215明显抑制香蕉枯萎病菌菌丝生长，抑菌带宽度为0．5～0．6cm。 B215培养液滤液使FOC分生孢子和菌丝变形，分生孢子和菌丝生长点膨大成球状或 串珠状畸形j原生质外泄，细胞崩溃干瘪。B215从第1代到第40代的培养液滤液抑 制FOC孢子的鹏。大小差异很小，在4．12％一5．39％之间波动。 分生孢子致畸膨大成絮状。E353转管传代40次，其培养液滤液抑制FOC的五bo在 4．55％～5．36％之间波动。 菌株培养条件的基础上，通过正交设计优化温室盆栽试验，结合土壤中残余的FOC 的最佳组合均为：在小苗定植前，用活菌培养液(750mU株)浸根，可以降低小区的 62．95％和60．67％。 4、通过灌根伤根和针刺等植株体外接种方法，检测菌株在香蕉假茎内的定殖力， 同时测定拮抗菌株对香蕉植株的致病性。同时经过不同的温度和酸碱度处理后，对菌 株培养液滤液的理化性质做初步研究。 菌株B215、E353均可在香蕉假茎内定殖且时间持续25d以上，对香蕉植株无致 病性。菌株回收后通过拮抗性测定、形态特征鉴定、16SrDINA序列与原始菌株的序 列分析比对等证明菌株在香蕉假茎具有内生定殖力。 活性；保持活性的最适宜pH值为7．O。 关键词：香蕉枯萎病；生防微生物：拮抗机理；枯草芽孢杆菌；菊欧氏杆菌 lI IdentificationTwo Strains仔omBaIlalla Isolationa11d of Endophytic TheseS仃aillsonBanana a11dTestoftheBiocontrolEffectof 1、，asi