牛粪沼液拮抗细菌的筛选.pdfVIP

2014年3月 黑龙江生态工程职业学院学报 Mal．2014 of VocationalInstituteof V01．27No．2 Journal 第27卷第2期 Heilongjiang EcologicalEngineering doi：10．3969／j．issn．1674—6341．2014．02．008 牛粪沼液拮抗细菌的筛选 范金霞1 李文涛2 吕庆元3 李晓书2 李文哲¨ (1．东北农业大学工程学院，黑龙江哈尔滨150030；2．黑龙江八一农垦大学工程学院，黑龙江大庆163319； 3．大庆油mg,J业腾飞建筑安装工程有限公司园林绿化工程分公司，黑龙江大庆163000) 摘要：沼液具有防治病害的功效，研究采用平板分离和拮抗试验等方法，从牛粪沼液中筛选出43株细菌，其 中对立枯丝核菌有较强抑制作用菌株13株；对茄腐镰刀菌有较强抑制作用茵株15株；对核盘茵有较强抑制作用茵 株19株；对雪腐镰刀茵有较强抑制作用茵株19株，对尖孢镰刀茵有较强抑制作用茵株19株。对nfd一17；nfd-18； 都很强，抑茵谱广泛，研究结果为沼肥的田间施用及商业产品研发提供理论依据。 关键词：牛粪沼液；抑茵；病原茵；拮抗细茵；筛选 中图分类号：S436．3 文献标志码：A 文章编号：1674—6341(2014)02—0013—05 沼液是生物质厌氧发酵剩余物，含多种作物所需的水溶 性营养成分，养分可利用率高，能迅速被作物吸收利用，并含 109／L。 有丰富的维生素、矿物质元素、蛋白酶以及氨基酸等多种营 沼液：取自正常发酵产气的沼气池，发酵原料为牛粪。 养成分¨。3J，已施用于蔬菜H“J、大田作物o“，可提高作物的 1．2试验仪器 产量和品质，是优良的绿色肥料。沼液除可以用作施肥外， 试验所用主要仪器：无菌操作台(sw—cJ—2D)，恒温培 已有研究显示沼液对多种蔬菜病虫害具有明显的抑制作 用哺1，现有的报道和有关报道表明沼气发酵液对各种农作物 中的近30多种病虫害具有一定的防治作用，与农药相比具 一50FBS)，天平。 有无抗性、价格低廉等优势，是理想的农药代替品。沼液对 1．3试验方法 病原菌的抑制机理问题已渐成为热点问题。 1．3．1植物病原菌的活化 本研究以牛粪厌氧发酵产生的沼液为研究对象，对其进 将保存4。C条件下五种植物病原菌分别接种于PDA培 行拮抗细菌的分离和纯化，并进行室内拮抗筛选试验，旨在 养基上，28。C培养7d，备用。 获得抑制效果显著的微生物，为探明沼液沼渣的抑菌机理提 1．3．2沼液中拮抗细菌的分离和纯化 供理论依据；同时本试验的开展为沼液复合型杀菌剂产品的 准确移取4。C保存的沼液10mL于无菌水中，按10倍法 商业化开发提供参考，对沼液的高效利用具有重要的意义。 依次稀释至10～。取50卜LtO～一10一7不同浓度的沼液于 1材料与方法 LB固体培养基上，立即用灭菌的涂布棒均匀涂布于培养基 1．1试验材料 表面，37。C培养1～3d，挑去单独的菌落，在LB固体培养基上 供试病原微生物：立枯丝核菌、茄腐镰刀菌、核盘菌、雪 纯化培养3—4代后，获得纯菌，4。C保存备用。 腐镰刀菌和尖孢镰刀菌，由东北农业大学生物质能源实验室 1．3．3拮抗试验 保藏。 将筛选出的各个菌种分别接种于灭菌后的LB液体培养 试剂：葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、NaCl等试剂均为分析纯。 基，在摇床中37。C培养过夜，转速为100r／rain，获得新鲜菌液。 dextrose 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato agarmedium， 拮抗试验采用混