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第7卷第 6期 过 程 工 程 学 报 Vb1．7No．6
2007年 12月 TheChineseJournalofProcessEngineering Dec．2007
Kitasatosporasp．MY5—36中 聚赖氨酸降解酶的纯化及酶学性质
冯小海， 徐晓滢， 姚 忠， 徐 虹
(南京工业大学制药与生命科学学院，材料化学工程国家重点实验室，江苏 南京 210009)
摘 要：对Kitasatosporasp．MY5-36中 聚赖氨酸降解酶(PLD酶)进行了纯化和酶学性质研究．通过DEAE．Sepharose
Source15Q，MonoQ三步阴离子交换层析从细胞中得到纯酶，收率达40．7％，纯化倍数为500倍．经SDS—PAGE电泳、
凝胶过滤层析检测PLD酶由2个同聚亚基组成，亚基和全酶相对分子量分别为43．6和 87．0kDa．PLD酶的最适反应
温度为3O℃，最适pH值为7．0，20~40℃保存时酶活力稳定，50～60℃保存时酶活力迅速下降，最大反应速率 V~x=0．1I2
mmoV(Lm·in)，米氏常数 1=0．2I6mmolL／．PLD酶是一种金属酶，能够被co激活、被ca抑制．
关键词： 聚赖氨酸降解酶(PLD酶)；阴离子交换层析：酶学性质
中图分类号：Q556．3 文献标识码：A 文章编号：1009—606x(2007)06—1207—05
1 前 言 现保藏于中国典型培养物保藏中心，培养条件参见文献
聚赖氨酸(c-Poly．L．1ysine，PL)最早由Shima ， [12]．
在S．albulus中发现，是一种由L．赖氨酸中的仪．羟基和 PLD酶的制备在韩国KF．5L 自动控制发酵罐上进
氨基连接而成的聚氨基酸．c-PL作为一种安全高效的 行，发酵体积 3L，接种量 10％(，发酵温度 28℃，
天然生物防腐剂受到了广泛的关注3【]． 转速400r／min，通气量2,0L／min，自动流加氨水(10％，
c-PL的生产过程中合成和降解同时存在，降解由 控制pH4．0，培养72h后发酵液冷冻离心(4℃，12000
r／min)30min，收获菌体．
聚赖氨酸降解酶(c-Poly—L-lysine-degradingenzyme，PLD
酶1引起，研究PLD酶的性质对保证c-PL的正常发酵和 2．2主要试剂与仪器
高产c-PL具有十分重要的指导意义[6墙]．除c-PL生产菌 赖氨酸一对硝基苯胺(Lys-pNA)，维生素B12(Sigma
外，一些耐受c-PL的菌中也存在PLD -l0]．Kito等[8-10] 产品)，DEAE-Sepharose，Source15Q，MonoQ，Sephacryl
对c-PL生产菌S．albulus和耐受c-PL菌株S．multivorum S．300等填料及分子量标准蛋 白(HMW GelFiltration
OJ10，Chryseobacteriumsp．OJ7中的PLD酶进行了纯化 CalibrationKit)为 Amersham Bioscience产 品，蛋 白
和相关性质的研究，认为不同菌株中的PLD 酶存在较 Marker及电泳相关试剂为Amresco公司进 口分装产品，
其余试剂均为分析纯．KF一5L发酵机(韩国KBT)，蛋白
大差别，S．albulus，S．multivorumOJlO中的PLD酶为外
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