LCR技术在检测淋球菌和泌尿生殖道沙眼衣原体感染中的应用.pdfVIP

维普资讯 口岸卫生控制 第 12卷 第 6期 LGR技术在检测淋球菌和泌尿生殖道 沙眼衣原体感染中的应用 张晓航 田桢干 朱锦德 (审校)上海出入境检验检疫局 (上海，200335) 中图分类号 R378．1 文献标识码 B 连接酶链反应技术 (LigaseChainReaction， 24h内送至实验室或低温保存(一20℃保存60d)。检 LCR)与PCR技术相似，是近年来发展的一门新的分 测前先将尿样混匀，然后加 1ml尿样到 1．7ml的 子生物学技术，LCR技术与PCR相比所不同的是，其 微型离心管中，以13000—16000转 的速度离心 使用了两对引物对靶序列作扩增，同时在扩增过程 10min，去掉上清液，再加入 1ml裂解液溶解其沉 后，还应用微粒子酶免疫技术(MEIA)对扩增产物进 淀物，然后在97℃加热 15min，冷却至室温。上述 行测定，进一步提高了检测的敏感性和特异性。本文 标本若在4d内检测 ，在 4℃下保存，否则一70℃冷 就近年来LCR技术在临床检测淋球菌(GN)和泌尿生 冻保存 1。 殖道沙眼衣原体(CT)的应用情况综述如下。 1 LCR的基本原理 I ■●■●●●● ■■■_ LCR是 Wu和Wallence于 1989年把基因扩增 l —■■_ ■■■■■I 技术和连结酶方法结合起来，建立了LCR，也称依靠 连结酶的扩增反应(LAR)t”。其基本原理f见图1)是二 条寡核苷酸探针与靶DNA单链互补时，给予一定条 I ■●■●●●● —■■_ t 件，就会与靶 DNA结合。若其中的一条寡核苷酸的 l —■■_ ■■■■■I · 5’磷酸基与第二条寡核苷酸的3’基紧紧相邻时， DNA就会促使生成一个大磷酸酯键 ，将相邻寡核苷 酸连结成一条长的DNA双链；这时如果升高溶液温 Tclpt 度，使其变性，新生成的DNA双链解链，他们又会成 I ■—■——一 [] —■■_ 2 l —■■_ [=] ■■■■■● · 为下一个循环的模板，存在于溶液中的寡核苷酸又 Tclpt 会结合在各 自互补的单链DNA模板上；接着DNA连 结酶再次将相邻的二条寡核苷酸连成一条新链。照此 Tclpt 变性、退火、连结重复进行，原来的靶 DNA就会呈指 数增长。若单一碱基不能与模板DNA配对时，连结酶 就不能将二条寡核苷酸连成一条新链，靶DNA就不 能被扩增，连接酶链反应技术原理详见图1。 图 1 酶链 反 应 技术 原理 图 2 标本的收集与处理 3 扩增和产物检测 标本收集可采用拭子涂样或尿样，前者标本采 在扩增管中加入 100Ixl的样品，同时分别设 2 集多用棉拭子或人造纤维拭子，宫颈取材也可用细胞 管阴性对照和阳性对照。LCR扩增管反应液由热稳定 刷，取材方法与细胞培养和PCR取材方法一样 l,3『1。尿 的DNA连结酶和DNA聚合酶、NAD、Mg、dCTP或 样一般收集晨尿或保持至少 1h后不排尿的首段尿 dGTP、羟乙基哌