气相和高效液相色谱法测定油菜籽(饼)中的硫代葡萄糖甙.pdfVIP

研究报告 气相和高效液相色谱法测定油菜籽 饼（） 中的硫代葡萄糖甙* 吴谋成 熊时中 袁俊华 周永明 牟同敏 华（中农业大学中心实验室，武汉） [提要]本文报道气相色谱和高效液相色谱法测定油菜籽饼（）中硫代葡萄糖甙的样品预 处理技术和测试技术。气相色谱法采用氢焰离子化检测器，3mm 1.6m玻璃柱，2％OV-1或 2％OV-7固定液，ChromosorbW AW DMCS担体 6（0—80目）。高效液相色谱采用4mm 250mm不锈钢柱，柱内填充YWG-C18H37(10m 2)。流动相为3％乙腈，UV-220nm检 测。GC和HPLC测定结果一致。与经典重量法对照，总量绝对误差小于1.12mol/。气相和 液相色谱重复性试验，总量的标准偏差分别为0.10和0.67。首次指出我国油菜含有吲胚哚类硫代 葡萄糖甙和大致含量。 油莱是我国的主要油料作物。油菜籽 指出，TMS法重现性差，对同一样品测定 饼（）中含有硫代葡萄糖甙 G（lucosinola- 结果差异颇大。因此，许多学者正致力于 tes，以下简称硫甙），它在内源芥子酶的作 HPLC的研究[6-13]。 用下，水解成恶唑烷硫酮、异硫氰酸盐、腈 本文着重讨论样品制备技术，TMS法 等有毒物质，影响了油菜饼的品质。国内外 重现性差的原因，GC和HPLC的色谱条件。 育种工作者正致力于培育低硫甙品种，以提 在仅有烯丙基硫甙的情况下，对各峰进行定 高油菜籽 饼（）的食用及饲用质量。因此， 性和修订定量校正因子。研究了我国甘蓝 硫甙的测试技术是国内外的重要研究课题。 型、白菜型、芥菜型油菜的主 要硫甙组成， 我国已将其列入 “七五”国家重点攻关项 特别是国内尚未研究过的吲胚哚类硫甙的种类 目。 和含量范围。兹将研究结果报道如下。 硫甙的测定，分为总量和各组分 的测 定。我们曾提出过作为育种学家筛选育种材 实 验 方 法 料的总量测定方法[1,2]。但是，深入的研究 一（）试剂 要求我们对硫甙各组分进行准确的测定。 DEAE-SephadexA-25，Pharmacia进 硫甙各组分的测定，Thies[3,4]提 出用 口分装；烯丙基硫甙，AldrichChemical 离子交换树脂将样品中硫甙进行富集、分 Company,USA;BSTFA,E.Merck. 离，用硫酸酯酶脱掉硫甙中的硫酸根，制备 冰 乙酸、醋酸铅、醋酸钡、乙腈、 TMS衍生物，用气相色谱测定 简（称TMS TMCS、吡啶均为AR，上海试剂一厂出品。 法），使 TMS法成为各国通用的分析方 二（）色谱分析条件 法[3-5]。但是TMS法不能测定易于热解的硫 气相色谱采用氢焰离子化检测器；3mm 甙，如吲哚类硫甙。据Roger(1982)报道，在 1.6m玻璃柱，2％OV-1或2％OV-7固定 甘蓝型油菜中，吲哚类硫甙约含14mol/g， 液，ChromosorbW AW DMCS担体 6（0 油菜品质育种仍不能忽视。此外，在1983年巴 黎国际油菜分析化学会议上，B.Uppstǒm ＊本文摘要曾在第六次全国色谱学术报告会宣读过， -80目）；程序升温：初始温度190 ，终止 次，再用2—4ml水洗二次。加入lml0.2％硫 温度280 ，升温速率3 /min；进样口谖温度： 酸酯酶 H（-1型），待近干时，塞紧塞子， 300；载气流速：N230ml/min，H250ml/ 放置过夜。每次用1ml水，连续淋洗色谱柱 min，空气500ml/min。高效液相色谱采用 4次。将淋洗液合并，摇匀后供测定用。 紫外检测器，检测波长220nm；4mm