副溶血性弧菌细胞猝灭及代谢物组提取方法优化.pdfVIP

第39卷 分析化学 ( FENXI HUAXUE) 研究报告 第 11 期 2011年11月 Chinese Journal of Analytical Che istry 1689~ 1694 DOI: 10.3724/ SP.J. 1096.2011.01689 赵 强 刘海泉 卢瑛 孙晓红 潘迎捷 赵勇* (上海海洋大学食品学院, 上海 201306) 以气相色谱-质谱联用(GC-M S) 为分析方法, 较了液氮和75% 甲醇(- 80 ) 两种溶液对副溶血性 弧菌细胞的猝灭效果, 以及氯仿、75%冰甲醇、水、甲醇-氯仿-水( 1031, V/ V) 、甲醇-氯仿- 水( 311, V/ V) 、甲醇-氯仿( 11, V/ V) 6种提取剂对副溶血性弧菌代谢物组的提取效果。结果表明, 用75% 甲醇(- 80 ) 猝灭副溶血性弧菌时, 出现了代谢物泄漏现象, 而液氮猝灭则不存在这个现象; 检索发现,采用75%冰甲 醇提取获得了47 种代谢物,峰面积标准偏差为8.02%,其它5 种提取剂获得代谢物种类少于40 种, 且重现性 差。 较色谱峰数量、面积和重现性后发现, 液氮猝灭、75%冰甲醇提取适于副溶血性弧菌代谢物组提取。 副溶血性弧菌; 猝灭方法; 代谢物组提取方法; 气相色谱-质谱联用 1 代谢组学通过定性与定量研究生物体内代谢物的变化研究生物体代谢途径,代谢组学主要关注分 [ 1] [2] [3~ 5] 子量小于1000 的小分子 。目前,代谢组学的研究已在药物研发 、代谢成分研究、疾病检测 、生 [6] 物标志物寻找 等方面展开。近几年代谢组学在微生物研究中迅速展开, 已对部分微生物代谢物提取 [7~ 9] [ 10] 方法进行了优化 ,并研究了猝灭过程中的冷休克现象 。 副溶血性弧菌是一种常见的食源性致病菌, 由该菌引起的食物中毒事件占细菌性食物中毒事件 [ 11] 60% 以上 。代谢组水平研究是副溶血性弧菌的致病机理的重要研究内容。本研究对副溶血性弧菌 细胞猝灭及代谢物组提取方法进行了优化,为副溶血性弧菌代谢组学分析奠定了基础。 2 2.1 5975B 型质谱、6890N 型气相色谱( 美国Agilent 公司) ; JY92-IIN 超声波细胞粉碎机(宁波新芝生 物科技股份有限公司) ;Her le Z36HK 冷冻离心机( 德国Her le 公司) ;真空干燥机( 美国Eppendorf 公司) ; 1 L 色谱注射器(上海晆录贸易有限公司) ; Mill-i Q 制水系统(美国Millipore 公司) 。 N- 甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺(MSTFA) 、甲氧胺盐酸盐、吡啶( 色谱纯,美国Sig a 公司) ; 甲醇、氯仿(分析纯, 国药集团) ; 胰蛋白胨大豆培养基(北京陆桥技术责任有限公司) ; 副溶血性弧菌 ATCC33846( 中国科学院微生物研究所) 。 2.2 TM SLB -5 s 色谱柱(60 0.25 0.25 ) ; 进样口温度280 ; 分流 51, 进样量 1 L; 载气:氦气;溶剂延迟4 in;载气流速: 1.0 L/ in, 色谱柱初始温度 120 ,保持4 in, 以3 / in 升至270 ,保持10 in。EI 离子源: 温度,230 ; 电子能量, 70 eV; 四级杆温度, 150; 全扫描模 式,扫描范围m/ z 18~ 800, 扫描速度: 20 次/ s。 2.3 将副溶血性弧菌接种于含5 L TSB 的试管( 150 15 ) 中,在37 , 以180 r/ in 摇床培