5-氮杂-2-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中Wif-1基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响.pdfVIP

窑论 著 窑 中国医药导报 2014年8月第 11卷第23期 5-氮杂-2-脱氧胞苷对HT-29 和LoVo结直肠癌细胞株中Wif-1基因甲基化状态、 mRNA表达及蛋白表达的影响 葛 畅 许春伟 王鲁平 方 园 张玉萍 北京军区总医院病理科袁北京 100700 [摘要] 目的探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷渊5-Aza-2-deoxycytidine袁5-Aza-CdR冤对结直肠癌细胞 株HT-29和LoVo中Wif-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响遥 方法用不同浓度渊0.5尧1.0尧1.5滋mol/L冤5-Aza-CdR 处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo遥 应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR渊Methylight冤方法尧SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验 渊Western blot冤 检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中Wif-1基因的甲基化状态尧 mRNA和蛋白表达遥 结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆 转曰实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5尧1.0尧1.5滋mol/L 5-Aza-CdR处理后 Wif-1基因mRNA和蛋白 重新表达袁实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5-Aza-CdR渊0.5尧1.0尧1.5 滋mol/L冤在HT-29细胞株 相对表达量分别为渊1.000依0.000冤尧渊1.207依0.052冤尧渊1.790依0.033冤和渊2.016依0.123冤曰在LoVo细胞株相对表达量分 别为渊1.000依0.000冤尧渊1.294依0.048冤尧渊1.893依0.061冤和渊2.204依0.041冤遥Westernblot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照 组和不同浓度5-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为 渊0.456依0.040冤尧渊0.511依0.025冤尧渊0.857依0.031冤和 渊0.934依0.047冤曰LoVo细胞株相对表达量分别为渊0.842依0.032冤尧渊0.844依0.044冤尧渊0.854依0.037冤和渊0.856依0.034冤遥 以 上作用均呈时间尧剂量依赖性袁Wif-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学 意义渊F=144.823袁P=0.000曰F=476.195袁P=0.000冤遥Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义渊F= 129.674袁P=0.000冤袁但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义渊F=0.117袁P=0.948冤遥 结论 结直肠 癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因遥5-Aza-CdR能 够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo 中Wif-1基因的甲基化状态袁并能恢复mRNA及蛋白重新表达遥 [关键词]DNA 甲基化曰5-Aza-CdR曰HT-29曰LoVo曰Wif-1基因 [中图分类号] R735.3 [文献标识码]A [文章编号] 1673-7210渊2014冤08渊b冤-0016-06 Effect of 5-Aza-dC on mRNA expression, protein expression and methy鄄 lation of Wif-1genestatusin HT-29 andLoVo Colorectalcancer GEChang XU Chunwei WANGLuping FANG Yuan ZHANG Yuping DepartmentofPathology,the Military General Hospitalof BeijingPLA, Beijing 100700,China [Abstract]Objective To investigate the effects of 5-Aza-2-deox