双错配碱基ARMS结合RE法快速检测FGFR3基因的突变超热点.pdfVIP

分子诊断与治疗杂志 2010年1月第2卷第 1期 JMolDiagnTher,January2010，Vo1．2No．1 ·5 · · 论 著 · 双错配碱基ARMS结合RE法快速检~IFGFR3基因 的突变超热点 郭奕斌 潘宏达 郭春苗’ 潘敬新” 赵燕 杜传书 摘【 要】 目的 建立快速简便、特异灵敏的鉴定FGFR3基因c．1138GA突变超热点的基因诊断方 法，为软骨发育不全 (ACH)的产前基因诊断或植入前遗传学诊断(PGD)创造条件。 方法 针对突变率高 达95％以上的FGFR3基因的突变热点c．1138GA，设计双错配碱基的ARMS特异引物，对已经临床确诊的 先证者家系及正常对照和非c．1138GA突变的患者对照，分别用普通引物和特异引物进行PCR扩增和直接 鉴定，然后对扩增产物进行DNA序列分析及SfcI酶切鉴定。 结果 用普通引物扩增，对照组和先证者均 扩增 阳性 。SfcI酶切后 ，对照组仍为一条513bp的带 ，而患者切出205bp、308bp和513bp三条带 ；而用 AMR S特异引物扩增，则先证者扩增阳性 ，而对照组扩增阴性 ，阳性者酶切后产生27bp和418bp两条带。 这一切都与预期的结果完全吻合 。 结论 该法快速、特异 、准确性高 ，结合DNA序列分析和酶切鉴定 (RE)，可用于ACH高危胎儿的快速产前诊断。 关【键词] 软骨发育不全 ；FGFR3基因；突变热点；AMR S法；基因诊断 Rapiddetection ofFGFR3gene mutation superhotspotwith double mismatch base pairsARMScombinedwithREassay GUOYibin ，PAN Hongda，GU0 Chunmiao，PAN Jingxin ，ZHA0Yan．DU Chuanshu (1．DepartmentofMedicalGenetics，SunYat-senMedicalCollege，SunYat—senUniversi Guangdong， Guangzhou 510080，China；2．WestChinaSchoolofMedicine，SichuanUniversity,Sichuan，Chengdu610041 China；3．DepartmentofInternalMedicine，TheSecondAffiliatedHospital，FujianUniversiyt ofMedical Science，FujJan，Quanzhou362000，China) A【BSTRAC~ Objective Toestablisharapid，convenient，highlyspecificandhighlysensitivediagnostic methodtoquicklydetermineFGFR3genec．1138GA supermutationhotspot，andprovideaprerequisiteforfuture prenatalgenediagnosisorpreimplantationgeneticdiagnosisofachondroplasia． Methods FortheFGFR3gene mutationhotspotc．1138GA，whosemutationrateisupto95％，wedesignedAMR Sspecificprimerofdouble mismatchbasepairs，PCRdirectamplificationandidentificationwereperfomr edonhtepedigreeofhteclinicaldefinite probandandnormalcontrolsandpatientcontrolswhoweren’tc．1138GA mutationusingordinaryprimerand specificprimerrespectively,andDNA sequenceanalysisandSfcIenzymedigestionidentificationwasconductedon theampl