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农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2008,16 (1): 148~153
·研究论文 ·
重组水稻几丁质酶的发酵生产 、 纯化及酶学性质 *
1,2 , 1 , 2 , 2 , 1 , 2 **
阎瑞香 吴 仲 侯建华 丁东风 关文强 李明刚
(1. 国家农产品保鲜工程技术研究中心， 天津市农产品采后生理与贮藏保鲜重点实验室， 天津 300384；
2. 南开大学分子生物学研究所 ， 生物活性材料教育部重点实验室 ， 天津 300071)
摘要：用 7L发酵罐对毕赤酵母( )工程菌株 NB01进行 了重组几丁质酶的诱导表达， 通过提高通气量和调整
， 使溶氧维持在 ， ， 酶活最高可达
搅拌转速 30%以上 NB01可在发酵 84h 内达到产酶高峰 48.0795U/mL。利用中空纤维超滤膜
对发酵液浓缩、 提纯 ， 再经过 Sephadex G100柱层析后得到单一组分的重组几丁质酶， 酶纯度提高了 7.9961倍 。重组几丁质酶
在 60 ℃以下具有良好的热稳定性 ， 在 pH2~6 范围 内有较强的耐受力 ， 在 4℃条件下贮藏具有较好的稳定性。
： 发酵； 纯化
关键词 重组几丁质酶； 基 因工程菌；
中图分类号: S182 文献标识码: A 文章编号: 10061304(2008)01014806
Production,Purification and CharacteristicsoftheRecombinant Chitinase from Rice
1,2 1 2 2 1 2
YAN Ruixiang ,WUZhong ,HOUJianhua ,DingDongfeng GUANWenqiang ,LIMinggang **
，
In a 7 L fermentor,production conditionsof engineering strain NB01containing chitinasegenewere in
vestigated.Themaximum chitinaseactivitycouldreach 48.0795U/mL at 84hwhiledissolution oxygen (DO) levelmaintaininghigher
than 30% by enhancing aeration and changing agitation rate. The fast purification of recombinant chitinase was conducted with Hol
low fiber UFmembraneand Sephadex G100,and SDSPAGE analysisindicatedthat therewasa singlebandwiththeright molecular
weight corresponding to the chitinase, so purification multiple of chitinase was enhanced 7.9961. Furthermore, the recombinant en
zymewasstableat 60 andpH2~6.Anditwasrath
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