极耐热性阿拉伯糖苷酶基因表达、纯化及酶学性质的研究.pdfVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 $% ’!! ,% ’ 年 月 ##! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ()*+ ##! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 极耐热性阿拉伯糖苷酶基因的表达、纯化及酶学性质研究 薛业敏 毛忠贵 邵蔚蓝 （江南大学工业生物技术教育部重点实验室 无锡 -!#E1 ） 摘 要：采用 从海栖热袍菌（ ）克隆出编码极耐热稳定性阿拉伯糖苷酶基因，以 为 IJK !#$%’() %)$*’*%) )9.2#@ 表达质粒，与其 末端 个组氨酸标签序列融合，在大肠杆菌中得到高效表达。基因表达产物通过热处理和亲和 J 1 层析柱纯化后，酶纯度达电泳均一。纯化重组酶稳定性检测表明，阿拉伯糖苷酶活性最适作用温度和最适作用)L 分别为 和 ，在 之间酶活力稳定， 的半衰期为 ； 测得酶的分子量 5# M 53N )L 3 ’# M 3 ’3 )L ! ’ M 0 ’ 53N != OPO2I(Q9 为 ，与理论推算值相吻合。在所测定的底物中，阿拉伯糖苷酶仅对对硝基苯 阿拉伯呋喃糖苷（ ）有 31 ’34 RP 2 + ,I(6 专一性水解作用，其动力学参数 值为 ， 为 · 。 ,: # S -0::%T U -:78 -E5 :%T:+B :V ! 关键词：阿拉伯糖苷酶，基因表达，重组酶纯化，酶学性质 中图分类号： 文献标识码： 文章编号 （ ） W401 ( ###-21#5 ##! #2##2#1 ［ ］ 木聚糖类半纤维素是仅次于纤维素的植物多 : 12/) ’ 1 M -# 。其中来自87’#$%12 %)$*512 的阿拉 糖，其结构比较复杂，含有大量的侧枝取代基。木聚 伯糖苷酶是目前报道的极端耐热菌中热稳定性最高 糖的完全降解需要多种酶（即木聚糖酶系统）的协同 的酶，其 半衰期为 ， 半衰期为 ， 03N 0 ’ E= 5# N -4:+B ［］ 作用，它包括 ， 内切木聚糖酶（ ， 最适 为 0 。海栖热袍菌（ 2- !2 9BX% 2- !2 )L 3 ’ 3 M 4 ’ # !#$%’() ，